B型肝炎ウイルスX蛋白と相互作用する宿主分子の同定と肝発癌の分子機構

乙型肝炎病毒X蛋白相互作用宿主分子的鉴定及肝癌发生的分子机制

• 批准号: 16021211
• 负责人: 金井 文彦
• 金额: $ 3.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16021211/
• 关键词: B型肝炎ウイルス; 肝細胞癌; 肝発癌; X蛋白; 質量分析; AP-1; Jab1

B型肝炎ウイルス(HBV)は、永い年月をかけて肝臓をむしばみ、慢性肝炎から肝硬変、ひいては肝細胞癌、肝不全をひきおこす。本邦においてHBV新規感染は減少しているものの、今なお肝硬変やHCCの20%に関与している。HBVによる肝発癌はC型肝炎によるものに比べ若年発症であり、またウイルスゲノムが宿主ゲノムに組み込まれることからoncogenicウイルスと考えられている。今までの報告からHBVのX蛋白が発癌に関与していると考えられている。HBx遺伝子産物と結合する宿主内蛋白をHBV遺伝子型別に同定し機能解析を行うことで、HBVによる肝発癌の分子機構を明らかにすることを目的として研究を行なった。Myc tagとFlag tagの配列間にTEVプロテアーゼの切断配列をもつdual tag発現プラスミドにB型肝炎ウイルスの遺伝子産物であるHBxのcDNAをクローニングした。このプラスミドを哺乳類細胞に導入し、Myc・Flagの2つのタグにより肝炎ウイルス蛋白複合体を高純度に精製し、その複合体を形成する蛋白を溶出後、SDS-PAGEにて展開し銀染色を施行。肝炎ウイルスに特異的に結合するバンドをゲルから切り出し、プロテアーゼ消化後質量分析計により蛋白質の同定を行った。本実験でHBxと結合する宿主分子の複合体コンポーネントのひとつとしてJab1(Jun activation domain-binding protein 1)を同定した。この蛋白はHBxと直接結合し、HBxのアミノ酸30-125の領域に結合することが明らかとなった。またこの両者は細胞質に共局在し、HeLa細胞に共発現させることでHBxにより誘導されるAP-1の活性化が増強された。一方、Jab1と結合できない変異体HBx(60-154)ではその働きが無く、両者の結合がAP-1活性化に重要であることが明らかとなった。

Hepatitis B ウ イ ル ス (HBV) は, yong い years を か け て routine liver を む し ば み, chronic hepatitis か ら liver hard -, ひ い て は hepatocellular carcinoma (HCC), liver insufficiency を ひ き お こ す. State に お い て new rules on HBV infection は reduce し て い る も の の, today な お liver hard - 20% や HCC の に masato and し て い る. HBV に よ る 発 liver carcinoma は hepatitis C に よ る も の に 発 disease than if べ years で あ り, ま た ウ イ ル ス ゲ ノ ム が host ゲ ノ ム に group み 込 ま れ る こ と か ら oncogenic ウ イ ル ス と exam え ら れ て い る. Today, まで <s:1> reports the に association of が cancer occurrence of らHBV <s:1> X protein and the えられて て ると ると ると ると えられて えられて る る. HBx heritage 伝 zi chan content と combining す る を HBV heritage within the host protein 伝 sub-type set analytical を し function on the same line don't に う こ と で, HBV に よ の る 発 liver cancer molecular institutions を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て を line な っ た. Myc tag と Flag tag の match between column に TEV プ ロ テ ア ー ゼ の cut with column を も つ dual tag 発 now プ ラ ス ミ ド に hepatitis B ウ イ ル ス の heritage 伝 zi chan content で あ る HBx の cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し た. こ の プ ラ ス ミ ド を mammalian cells に import し, Myc Flag の 2 つ の タ グ に よ り hepatitis ウ イ ル ス protein complex を high-purity に refined し, そ の complex を form す る protein を after dissolution, sds-page に て expand を し silver stain. Hepatitis ウ イ ル ス に specific に combining す る バ ン ド を ゲ ル か ら り し, cutting プ ロ テ ア ー ゼ quality analysis meter after digestion に よ り protein の with fixed line を っ た. This be 験 で HBx と combining す る host molecules の complex コ ン ポ ー ネ ン ト の ひ と つ と し て Jab1 (Jun activation domain - binding protein 1) を with fixed し た. こ の protein は HBx と directly combining し, HBx の ア ミ ノ acid 30-125 の に combining す る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た こ の struck は cytoplasm に total bureau in し, HeLa に total 発 now さ せ る こ と で HBx に よ り induced さ れ る AP - 1 の activeness が raised strong さ れ た. Side, Jab1 と combining で き な い - variant HBx (60-154) で は そ の 働 き が no く combination, struck の が AP - 1 activation に important で あ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Interaction of hepatitis B virus X protein (HBx) with heat shock protein 60 enhances HBx-mediated apoptosis.

乙型肝炎病毒 X 蛋白 (HBx) 与热休克蛋白 60 的相互作用可增强 HBx 介导的细胞凋亡。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 318
• 作者: Tanaka Y;Kanai F;Kawakami T;Tateishi K;Ijichi H;Kawabe T;Arakawa Y;Kawakami T;Nishimura T;Shirakata Y;Koike K;Omata M.
• 通讯作者: Omata M.