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組織幹細胞を用いた核移殖クローンマウスの作成と再プログラム化の解析

利用组织干细胞创建核移植克隆小鼠并分析重编程

基本信息

批准号：
16045219
负责人：
三好浩之
金额：
$ 3.84万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16045219/
关键词：
核移植クローン再プログラム化幹細胞

项目摘要

体細胞核移植クローン技術は、医療や畜産など多岐にわたる分野での応用が期待されている。しかしながら、体細胞クローン動物の産出率が極めて低いことやクローン動物に生じる様々な異常が大きな問題となっている。これらの問題を解決するためには、再プログラム化のメカニズムを明らかにし、正確でかつ効率のよい再プログラム化を行うための技術開発が必要である。これまでのところ、ES細胞を核ドナーとしたクローンの作出効率は他の体細胞よりも高いことから、未分化な細胞の核は終末分化した細胞よりも再プログラム化され易いのではないかということが示唆されている。そこで本研究では、マウスの組織幹細胞を核ドナーとしたクローン胚あるいは個体を作出し、再プログラム化能力の評価を行った。まず、成体マウスの骨髄より単離した造血幹細胞を核ドナーとしたクローン胚を作出し、卵丘細胞の場合と比較した。造血幹細胞は2cellへの発生率は卵丘細胞と同程度に高かったが(約90%)、これは造血幹細胞の細胞周期がG0であることによると考えられる。一方、胚盤胞への発生率は非常に低く(6% vs 46%)、クローン産仔の産出率はわずか0-0.7%であった。造血幹細胞クローン胚では、接合体遺伝子の転写活性化および造血幹細胞に特異的な遺伝子の転写不活化は確認されたが、Hdac1など胚発生に重要ないくつかの遺伝子が活性化されていないことが判明した。また、神経幹細胞を核ドナーとしたクローン産仔の産出率は1.6%で、卵丘細胞と同程度であった。間葉系幹細胞の場合には、4cellへの発生率が非常に低くクローン産仔は得られなかった。これは、間葉系幹細胞を樹立する過程で起った染色体異常が原因であると考えられる。以上の結果より、組織幹細胞は多分化能を持つ未分化な細胞であるが、その再プログラム化能力は予想に反して低いことが明らかとなった。

Somatic cell nuclear transfer technology is expected to be used in medical, livestock and multi-disciplinary applications. The production rate of somatic cells is extremely low, and the production rate of somatic cells is abnormal. It is necessary to solve these problems and develop new technologies to solve them. This is the first time that ES cells have been able to differentiate from other somatic cells, but not from undifferentiated cells. This study was conducted to evaluate the ability of tissue stem cells to make and redevelop In the case of adult hematopoietic stem cells, there is no comparison between the number of stem cells and the number of embryos. Hematopoietic stem cell 2 cell cycle rate is higher than cumulus cells (about 90%), and the cell cycle of hematopoietic stem cells is higher than cumulus cells. The rate of blastocyst development was very low (6% vs 46%), and the rate of litter development was 0-0.7%. Hematopoietic stem cell embryo development, zygote gene activation and hematopoietic stem cell-specific gene inactivation were confirmed, Hdac1, embryo development important, gene activation was identified. In addition, the fertility rate of neural stem cells and cumulus cells was 1.6% and 1.6% respectively. In the case of mesenchymal stem cells, the growth rate of 4cell lines is very low. The cause of chromosome abnormality in the process of establishment of mesenchymal stem cells As a result, tissue stem cells are able to differentiate into undifferentiated cells, and their ability to redifferentiate into undifferentiated cells is expected to be low.