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遺伝子デリバリーのための新規な分子骨格を有するポリカチオンベクターの開発

开发具有新型分子骨架的用于基因传递的聚阳离子载体

基本信息

批准号：
17016066
负责人：
原田敦史
金额：
$ 2.82万
依托单位：
Osaka Prefecture University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、ポリリシン(PLL)とポリアミドアミンデンドロンからなるヘッド-テイル型ポリカチオンを合成し、PLLベクターの細胞内移行を効率化することによって、血清成分共存下で安定かつ良好な遺伝子発現効率を示す新規ベクターの開発し、さらに、良好な細胞内移行性に加えてヘッド-テイル型ポリカチオンに細胞認識機能を付与することによって細胞特異的な遺伝子導入システムとしての展開について検討を行った。ヘッド-テイル型ポリカチオンは、片末端がBoc基で保護されたエチレンジアミンの1級アミノ基ヘアクリル酸メチルをマイケル付加させる。その後、メチルエステル部分を、エチレンジアミンを用いエステルアミド交換する。このマイケル付加、エステルアミド交換を繰り返すことによってヘッド部を得た。その後、保護基を除去し、テイル部のβ-ベンジルオキシカルボニル-L-リシンN-カルボン酸無水物(Lys(Z)-NCA)の開環重合を行う。最終的に、酸処理を行うことによって、Lys(Z)をLysへ変換することによって、目的のヘッド-テイル型ポリカチオンを得ることに成功した。このポリカチオンについて、pDNAとのコンプレックス形成能をゲル電気泳動等により評価した後、培養細胞に対する遺伝子発現をルシフェラーゼアッセイにより評価した結果、ヘッド-テイル構造とすることによってPLLの遺伝子発現が著しく向上することが確認された。さらに、ヘッド部の先端にリガンド分子としてガラクトース残基を導入したものについて、ガラクトースレセプターが発現している細胞に対する取り込み量の時間依存性を、蛍光標識pDNAを用いて評価した結果、ガラクトースを導入していないものと比較して取り込みが促進されていることが確認され、リガンド分子の効果も働くことが確認された。

In this study, PLL was synthesized, PLL was optimized for intracellular migration efficiency, serum component co-migration was stable, and good transmission efficiency was demonstrated. Good intracellular migration increases cell cognitive function, and cell-specific gene transfer increases cell cognitive function. For example, if the terminal of the film is Boc group, the terminal of the film is Boc group. After the game, the game will be part of the game, and the game will be played. This is the first time that I've ever seen a woman. After the formation, the protective group is removed, and the β-ring of the tile-part is opened and the ring of the N-ring acid anhydrous (Lys(Z)-NCA) is overlapped. Finally, the acid treatment is successful. The results of the evaluation, the identification of PLL gene expression, the identification of PLL gene expression. The time dependence of the amount of DNA extracted from the cell in which the protein residue was introduced into the cell was evaluated using a fluorescent marker pDNA. The results were compared with the results of the introduction of the protein residue. The result of the search was confirmed.