セミインタクト細胞系を用いたアグリソーム形成機構の可視化解析

使用半完整细胞系统可视化分析聚集体形成机制

• 批准号: 17028009
• 负责人: 加納 ふみ
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17028009/
• 关键词: 細胞ストレス; 小胞体; 小胞輸送; 可視化; セミインタクト細胞; 小胞体関連分解; プロテアソーム

細胞内コレステロール排出活性を持つABCタンパク質ABCA1の一アミノ酸置換変異体ABCA1-QRは通常は小胞体に留まったままだが、小胞体ストレスに敏感に反応して小胞体を離脱し形質膜へと輸送されることを見出した。実際、ABCA1-QR-GFPを恒常的に発現しているstable transfectant(HEK-QR)に小胞体ストレス(DTT処理又はタプシガルジン処理など)を負荷したところ、小胞体に蓄積していたQR-GFPはおおよそ30分以内で核周縁領域に移行し蓄積する様子が観察された。つまり、小胞体に蓄積しERAD経路を取って分解されていたQR-GFPは、小胞体ストレス負荷により通常の小胞輸送経路を取って細胞形質膜へと輸送されるており、同一の膜タンパク質が小胞体内でERAD経路と小胞輸送経路を選別しうることが明らかとなった。そこで、申請者は小胞体ストレス依存的なQR-GFPの小胞体からの輸送に関わるキナーゼの網羅的同定を試みた。始めに20種類のキナーゼ阻害剤をHEK-QRに作用させた上で小胞体ストレスを負荷し、ジアシルグリセロールキナーゼおよびGSK3beta阻害剤などによって輸送が阻害されることを明らかにした。さらに、阻害剤の結果に基づいて当研究室が保持する細胞チップ自動作成装置を用いて網羅的キナーゼRNAiを行い、数種類のキナーゼが小胞体ストレス依存的なABCA1-QRの輸送に関与することを見つけた。今後はこのキナーゼ群の関与の確認、および詳細な分子メカニズムの同定を行う予定である。

Intracellular sterile excretion active material ABCA1-QR acid-replacement allogeneic ABCA1-QR is normal Small cell body に ま っ た ま ま だ が, small cell body ス ト レ ス に sensitive に reaction し て small cell body を detachment し-shaped plasma membrane へ と transport さ れ る こ と を 见出 し た.実记、ABCA1-QR-GFPに発现しているstable transfectant (HEK-QR) small cell body ストレス(DTT processing and はタプシガルジン processing など) を load したところ, small cell body に accumulates QR-GFP は お お よ そ within 30 minutes で periphery 縁 area に transfer し accumulates す 様子 が観看 さ れ た.つまり、small cell body accumulationしERAD経路をtakeってdecompositionされていたQR-GFPは、small cell body ストレスload によりnormal small cell transport経路をtakeってThe cell-shaped plasma membrane transports the same membrane, and the same membrane transports the same membrane into the small cell.そこで、The applicant's small cell body ストレス depends on the QR-GFP small cell body からのtransportation に关わるキナーゼのNET the same determination を test みた. Initial 20 types of inhibitors, HEK-QR, action, small cells, load, and load.リセロールキナーゼおよびGSK3beta blocked 剤などによってtransported blocked されることを明らかにした. The research laboratory maintains the automatic generation device of cells and collects the RNA using the RNA snare. iを行い, several types of small cell bodies are dependent on ABCA1-QR's transport gate and することを见つけた. From now on, we will confirm the customs and details of the group, and confirm the details of the details of the details.

项目成果

NSF/SNAPs and p97/p47/VCIP135 are sequentially required for cell cycle-dependent reformation of nthe ER network

NSF/SNAP 和 p97/p47/VCIP135 是 ER 网络的细胞周期依赖性重组所必需的

• 发表时间: 2005
• 期刊: Genes to Cells 10
• 作者: Kano;F.
• 通讯作者: F.

セミインタクト細胞アッセイ

半完整细胞测定

• 发表时间: 2005
• 期刊: リボソーム応用の新展開 人工細胞の開発に向けて(秋吉一成, 辻井薫監修)(NTS出版)
• 作者: Kano;F.;山内忍;村田昌之
• 通讯作者: 村田昌之

Reconstitution of Golgi disassembly by mitotic Xenopus egg extracts in semi-intact MDCK cells.

通过有丝分裂爪蟾卵提取物在半完整 MDCK 细胞中重建高尔基体分解。

• 发表时间: 2005
• 期刊: Methods in Molecular Biology
• 作者: Kano;F.
• 通讯作者: F.

セミインタクト細胞を用いた細胞内イベントの可視化解析

使用半完整细胞对细胞内事件进行可视化分析

• 发表时间: 2005
• 期刊: 生物物理 45
• 作者: Kano;F.;山内忍
• 通讯作者: 山内忍