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胚性幹細胞のin vitro分化系における性分化

胚胎干细胞体外分化系统中的性别分化

基本信息

批准号：
17052033
负责人：
野瀬俊明
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Mitsubishi Kagaku Institute of Life Sciences
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

マウスES細胞からの長期間胚様体培養は生殖細胞の出現及び減数分裂分化を促した。これは、ES細胞培養系が性分化の分子基盤を解明するうえで、貴重な培養モデル系となることを示す。本研究は、このES細胞培養分化系を用いて、経時的および人為的な培養条件の変動に伴うin vitro性分化を検討することから、雌雄性分化の制御機構を探る培養モデル系の構築を目指す。1.ES細胞in vitro分化系においてVasa陽性生殖細胞となった細胞には、雌雄の性差を反映する分化形質の発現が検出された。しかし、分化後3週目の胚様体には雌雄形質が混在することから、胚様体形成過程において雌雄生殖細胞が同一細胞塊に分化すると考えられる。一方、同時期の胚様体には性分化を制御する性腺支持細胞(セルトリ細胞や濾胞細胞)などの形質発現が検出されたが、組織染色の結果、性腺組織状の局在性は観察されず、生殖/支持細胞間の接触は局所的なものに留まると考えられる。2.ES細胞から精子・卵形成細胞への性分化を促す条件を知るため、雌雄分化促進因子であるWnt4(♀),及びMIS(♂)を強制発現する細胞を作成し、両者とES細胞の共培養系における性分化を検討した。生殖細胞に現れる雌雄差を判別した結果は、雌雄それぞれの液性因子がin vitro性分化に対して、絶対的ではないものの一定の促進効果を持つことを示した。一方、新生児卵巣/精巣細胞との共存は性分化に対して顕著な差は見られなかった。3.上記ES細胞分化系に性腺支持細胞分化の可視化を導入するため、MIS-GFP遺伝子を作成し、組換えES細胞の樹立を行った。しかし、その発現レベルは可視化検出限界以下であったため、生殖/支持細胞を同時に可視化するES細胞系の樹立には至らなかった。より強力なレポーター遺伝子構築による再検討課題とされる。

ES cell growth and development in long-term embryo culture promotes germ cell emergence and meiotic differentiation. The molecular basis for sexual differentiation of ES cell culture lines is demonstrated. In this study, we aimed to explore the mechanism of differentiation between male and female ES cells and construct the culture system. 1. The differentiation of ES cells in vitro is reflected in the development of Vasa positive germ cells and sex differences. 3 weeks after embryo differentiation, male and female germ cells are mixed, and male and female germ cells are differentiated into the same cell mass during embryo formation The gonadal supporting cells (gonadal supporting cells and filter cells) of the embryo at the same time are detected, the results of tissue staining are detected, the gonadal tissue is detected, and the contact between the reproductive and supporting cells is detected. 2. The conditions for promoting the sexual differentiation of ES cells, sperm and egg forming cells, male and female differentiation promoting factors, Wnt4 and MIS were studied. The sex difference between male and female in germ cells is different, and the sex factor is different in vitro sex differentiation. The blue shift of the newborn egg/sperm cells is opposite to the sexual differentiation. 3. The above ES cell differentiation line was introduced into the visualization of gonadal support cell differentiation, MIS-GFP gene generation, and ES cell establishment. The ES cell line was established by visualizing the following limits: reproductive/support cells. A powerful tool for the construction of genetic code is to re-examine the problem.

项目成果

期刊论文数量（9）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

胚性幹細胞からの精子形成

胚胎干细胞的精子发生

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kentaro;Mizuno;野瀬俊明;野瀬俊明
通讯作者：
野瀬俊明

哺乳動物由来のVasaホモログ遺伝子のプロモーター配列を含む発現ベクター及びその利用

含有哺乳动物Vasa同源基因启动子序列的表达载体及其用途

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Tdrd1/Mtr-1, a tudor-related gene, is essential for male germ-cell differentiation and nuage/germinal granule formation in mice

DOI：
10.1073/pnas.0601878103
发表时间：
2006-10-24
期刊：
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
影响因子：
11.1
作者：
Chuma, Shinichiro;Hosokawa, Mihoko;Nakatsuji, Norio
通讯作者：
Nakatsuji, Norio

Genes associated with the formation of germ cells from embryonic stem cells in cultures containing different glucose concentrations