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バクテリアべん毛モーターの回転子複合体と固定子複合体の結晶化

细菌鞭毛马达转子和定子复合物的结晶

基本信息

批准号：
17053008
负责人：
薬師寿治
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

バクテリアべん毛モーターは、10種類以上の蛋白質がそれぞれ20〜30分子ずつ集まり、規則正しく組織化された超分子複合体である。本研究では、べん毛モーターの回転子複合体と固定子複合体のX線結晶構造解析を目標に据え、それらの大量発現系・大量精製系の確立と結晶化を行う。回転子複合体と固定子複合体の構造解析を通して、それらのダイナミックな相互作用や回転機構の洞察へと発展させる。本課題の研究成果としては、1.モーター蛋白質MotYの結晶構造解析、2.固定子複合体を構成するPomBの精製と結晶化トライアル、の二つに要約される。1.モーター蛋白質MotYの結晶構造解析MotYはビブリオ菌べん毛の回転に必須な因子として見いだされた蛋白質であるが、べん毛回転における具体的な役割はよくわかっていない。X線照射実験はSPring-8のビームライン41XUにて行った。Se-Met置換結晶を用いたMAD法により3.2Å分解能で位相決定後、2.9Åまで位相を拡張して分子モデルを構築した。現在までに270残基中約240残基のモデルを構築した。MotYは細長い分子で、二つのドメインから形成されていた。今後、構造精密化を進めながら、残りのモデルを構築する予定である。2.固定子複合体を構成するPomBの精製と結晶化トライアル固定子複合体の高分解能の構造解析を行うために、構成因子の一つであるPomBの大量調製を開始した。オクチルグルコシドを用い可溶化・精製を行い、培養液10L当り0.5mgの精製PomBを得ることができた。精製蛋白質の結晶化を試みたが、蛋白質性の結晶は得られていない。引き続き、界面活性剤などを中心に条件検討を重ねていく予定である。

Son back to planning complex と stator complex の structure を tong して, それらのダイナミックな interaction や back planning agencies の insight へと発 exhibition させる. The research results of this project are as follows: とてて, 1. Analysis of the crystal structure of the MotY <e:1> protein モタタ, 2. The fixon complex を forms するPomB と refining と crystallization トラアアに, <s:1> diにに offer される. X-ray irradiation experiment ビ SPring-8 ビビムラムラムラムラ 41XUにて line った. Se - Met replacement crystallization を with いた MAD method により decomposition can で phase after the decision, with 3.2 A 2.9 A まで phase を company, zhang して molecular モデルを build した. Now about 240 of the までに270 residues are built on モデをををた. MotY で slender <s:1> molecules で and two ドメドメドメ <s:1> ららららららららら form されてたた. In the future, the precision of the structure will be further を to めながら, and the remaining <s:1> モデをを construction will be する determined である. 2. Stator complex を constitute する PomB の refined と crystallization トライアル stator complex の high decomposition can の structure line をうために, constitute a factor のつである PomB の large modulation を began した. オクチルグルコシドを with い solubilization, refined を line 10 l when りい, cultures of 0.5 mg の refined PomB を have ることができた. The <s:1> crystallization of refined protein を test みたが and the <s:1> crystallization of protein みたが yield られてななな. Lead き続き, interfacial active tonic などを center 検に conditions for heavy をねていく designated である.