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網羅的アプタマー創製法の開発とがん関連創薬への応用

开发综合适体创建方法及其在癌症相关药物发现中的应用

基本信息

批准号：
18011003
负责人：
菊池洋
金额：
$ 4.35万
依托单位：
Toyohashi University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18011003/
关键词：
がんアプタマー RNA 疾患プロテオーム核酸医薬抗体医薬

项目摘要

ランダム配列のRNA集団の中から生体分子に特異的に結合できるRNA分子を選択増幅し、得ることができ、この分子を丁度抗体のように利用できる。この分子をRNAアプタマーという。RNAアプタマーを開発するためには、SELEX(Systematic Evolution of Ligands by EXponential enrichment)法を中心とする人工進化系が採用されるのが一般的である。本手法は、一度の操作で複数のRNAアプタマーを取得しようとするものである。これまでに、ヒト前立腺癌細胞の可溶性タンパク質を標的としたSELEX法を実施した結果、昨年度問題となった非特異的RNA結合タンパク質の存在によるSELEXの進行阻害の問題が本年度はある程度解決され、(1)SELEXのターゲットが複数存在しても人工進化させることが可能であること、(2)特異的な結合能を有するRNAアプタマーの選択が可能であることが示された。このような、網羅的なアプタマー創製に関する報告はこれまでなされておらず、当研究室オリジナルの手法であると自負している。特許出願を念頭に実験系の改良を行っているところである。また、本年度、網羅的に得られるRNAアプタマーのターゲットタンパク質を網羅的に同定するために、網羅的ノースウエスタン法を考案した。この手法は、網羅的なタンパク質ターゲットサンプルをメンブレン状に固定化し、蛍光ラベルした網羅的RNAアプタマーを結合させ、イメージアナライザーによって検出しようとするものである。この手法は予備的な段階であるので、まだ改良の余地が残されているが、特異的なアプタマーの結合が観察されており、メンブレンからRNAアプタマーを回収し、RT-PCRによって増幅可能であることも確認している。

The RNA set is composed of RNA molecules that bind specifically to living organisms. The RNA molecules are selected for amplification, acquisition, and utilization by antibodies. The RNA is missing. The RNA evolution method is based on SELEX(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment). The method is simple and easy to operate. The results of the SELEX method for soluble protein targeting of adenocarcinoma cells in the past year show that the problem of non-specific RNA binding to protein in the past year has been solved to a certain extent.(1) The problem of SELEX inhibition has been solved to a certain extent in the current year.(2) The problem of SELEX binding to protein in the past year has been solved to a certain extent.(3) Artificial evolution of SELEX has been possible.(2) Specific binding energy is available for RNA selection. The report on the creation of such a network should be submitted to the Ministry of Science and Technology. The idea of special permission is to improve the system. This year, the company has obtained the same amount of RNA as the company. The method includes the following steps: immobilizing the RNA in the form of a matrix, and combining the RNA with the matrix. This technique is based on the preparation of a sequence of DNA fragments, the possibility of further improvement, the detection of specific DNA fragments, the detection of DNA fragments, the amplification of DNA fragments by RT-PCR, and the identification of DNA fragments.