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海馬スライス培養を用いた神経ネットワークの活動依存的な神経新生過程の解析

海马切片培养分析神经网络活动依赖性神经发生过程

基本信息

批准号：
18021002
负责人：
石塚徹
金额：
$ 4.61万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

神経前駆細胞自身のアクティビティー,あるいはそれらを取り囲んでいるニューロンネットワークのアクティビティーが神経新生過程に与える影響を解析するために,前駆細胞がたどる運命(細胞系譜)の解析を試みている。ラットの海馬スライス培養標本の顆粒細胞層下部にEGFP遺伝子を持ったレトロウイルスを注入すると,3〜5日でEGFP発現細胞が見られ始めるが,その一方でこの間に消失する細胞も多く確認された。残ったEGFP発現細胞の多くは7〜14日にかけて分裂を行っていた。それらの細胞の中には,28日までにニューロン様の突起を伸長させている細胞も見られた。また分裂後に片方の娘細胞が消失してしまうものも見られた。ウイルス感染28日後のEGFP発現細胞の表現型を免疫染色法により同定したところ,EGFP+のみの表現型を示したものが48.8%,EGFP+/GFAP+のものが46.5%,EGFP+/NeuN+のものは4.7%であった。これらの細胞の中から,4週間にわたって追跡できた細胞を抽出して,その細胞系譜を作成した。現在のところEGFP+のみとEGFP+/GFAP+になる細胞の系譜の作成に成功しているが,EGFP+/NeuN+についてはまだ得られていない。EGFP+のみの表現型を示す細胞では,ウイルス感染4週間後の子孫細胞の表現型は全てEGFP+のみであった。同様にEGFP+/GFAP+の細胞では,子孫細胞は全てGFAP+で,不等分裂を示唆するような系譜は得られていない。アクティビティーの制御にはチャネルロドプシン2(ChR2)を利用する。ChR2改変体の作製とその機能解析では,コンダクタンスの増大したもの,長波長の光に対する応答性が増大したもの,不活性化が小さくなったもの,周波数応答特性の優れたものなど,野生型ChR2とは異なる特性を獲得し,より光刺激に適した改変体分子の作製に成功した。

The analysis of neurogenesis and its influence on the development of neurogenesis is being carried out by the analysis of the fate of neurogenesis cells (cell lineage). EGFP gene was injected into the lower part of the granular cell layer of cultured plums in hippocampus. EGFP cells were observed at 3 ~ 5 days after injection, and many EGFP cells disappeared at other time points. EGFP cells were found in 7 ~ 14 days after the first cell division. The cells in the middle of the cell line were elongated on the 28th. After division, the cells disappear. The phenotype of EGFP cells 28 days after infection was determined by immunostaining. The phenotype of EGFP + cells was 48.8%, EGFP +/GFAP+ cells was 46.5%, EGFP +/NeuN+ cells was 4.7%. In 4 weeks, the cells were extracted and the genealogy was established. The genealogy of EGFP+ and EGFP+/GFAP+ cells was successfully constructed, and EGFP+/GFAP + cells were successfully constructed. The phenotype of EGFP+ cells was changed, and the phenotype of offspring cells was changed 4 weeks after infection. The same EGFP+/GFAP+ cells are reversed, and the offspring cells are reversed. The control system of the mobile phone is used for the production of mobile phone 2(ChR2) The functional analysis of ChR2 modified molecule shows that the activity of ChR2 modified molecule increases, the response of ChR2 modified molecule increases, the inactivation of ChR2 modified molecule increases, the response of ChR2 modified molecule increases, the response of ChR2 modified molecule increases, and the response of ChR2 modified molecule increases.