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脂肪組織におけるフォークヘッド転写因子の新規結合蛋白の同定と機能解析

脂肪组织中新型叉头转录因子结合蛋白的鉴定及功能分析

基本信息

批准号：
18052013
负责人：
中江淳
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではフォークヘッド転写因子FoxO1の核内転写調節メカニズムを分子レベルで明らかにする目的で、その結合蛋白の同定をYeast two-hybrid screeningにより試みた。用いたbaitはマウスFoxO1のN末端でpreyに3T3-L1成熟脂肪細胞のcDNAを用いた。このscreeningにより機能未知の分子量約13万kDaの蛋白(P13)を同定し、その機能解析を行った。P13はFoxO1標的遺伝子promoterを用いたluciferase assayまた5XGAL4 luciferase assayにおいてFoxO1の転写活性を抑制し、肝細胞株において内因性のFoxO1標的遺伝子であるIgfbp1の発現を抑制した。以上からP13はFoxO1のrepressorとして働くと考えられた。P13は脂肪組織、3T3-F442A細胞の脂肪細胞への分化とともに発現が認められた。また、P13は脂肪組織において、摂食により発現が誘導され、絶食、インスリン抵抗性を有するLepr^db/dbマウスではその発現が低下していた。P13の機能を解析するため、P13のshRNAを発現するアデノウイルスベクターを作製し、分化誘導とともに3T3-F442A細胞に感染させた。内因性のP13のノックダウンにより脂肪細胞への分化が抑制され、P13は脂肪細胞への分化に必須であると考えられた。また、P13を脂肪組織において過剰発現させるトランスジェニックマウス(aP2-P13)を作製し、2ラインを解析した。白色脂肪組織で主に発現しているライン(WP13)では体重低下、脂肪組織量の低下、脂肪細胞サイズの小型化、インスリン感受性の上昇が認められた。また、褐色脂肪組織優位に発現しているライン(BP13)では、酸素消費量の増加、褐色脂肪組織におけるPGC1a、UCP-1の発現増加が認められた。以上から, P13は脂肪細胞、脂肪組織において、重要な働きをしうると考えられた。現在ノックアウトマウスはキメラの段階であり、作製完了次第、その表現型の解析を行う予定である。

In this study, the purpose of this study was to determine the intranuclear regulatory factor FoxO1 and the binding protein Yeast. two-hybrid screening is done. Use いたbaitはマウスFoxO1のN-terminal でpreyに3T3-L1 mature adipocyte のcDNAをいた.このscreening is a protein of unknown function (P13) with a molecular weight of about 130,000 kDa, and そのfunctional analysis is performed. P13 FoxO1 target promoter is used for luciferase assay and 5XGAL4 luciferase The assay shows that the activity of FoxO1 is inhibited, and the intrinsic FoxO1 gene of the liver cell line is inhibited. Above からP13はFoxO1のrepressorとして働くと考えられた. P13 adipose tissue, 3T3-F442A cells and adipocytes are differentiated and recognized.また、P13はadipose tissueにおいて、悂食により発appears inducingされ、hunger strike、インスリン Resistance を有するLepr^db/dbマウスではその発appears がlow していた. P13 function analysis, P13 shRNA performance analysis We produced and induced differentiation of 3T3-F442A cells and infected them. Intrinsic P13 inhibits the differentiation of adipocytes, and P13 inhibits the differentiation of adipocytes.また、P13をAdipose tissue において过剰発现させるトランスジェニックマウス(aP2-P13)をproductionし、2ラインをanalyticsした. The main symptoms of white adipose tissue (WP13) include low body weight, low fat tissue volume, miniaturization of fat cells, and increased susceptibility to fat cells.また, brown adipose tissue advantage に発appears しているライン(BP13) では, acid consumption のincreased, brown adipose tissue におけるPGC1a, UCP-1 の発appears to increase がcognize められた. Above, P13 fat cells, fat tissue, and important fat cells. Now we have completed the steps of making the stage of the ノックアウトマウスはキメラのstep, and the production of the そのphenomenon analysis を行 and the predetermined である.