細菌べん毛モーターの回転子複合体と固定子複合体の結晶化

细菌鞭毛马达转子和定子复合物的结晶

• 批准号: 18054010
• 负责人: 小嶋 誠司
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18054010/
• 关键词: 蛋白質; 分子モーター; 生物物理; ナノマシン

1)海洋性ビブリオ菌極べん毛モーター固定子複合体PomA/PomBの結晶化へ向けた大量発現と精製細菌べん毛モーターのエネルギー変換機構を理解するためには、共役イオンの流入に共役したトルク発生を担う、固定子複合体の立体構造を解明することが必須である。我々はNa^+駆動型のビブリオ菌を材料に用い、PomA/PomB固定子複合体の結晶化に向けて、ヒスチジンタグを融合した複合体の大腸菌での大量発現系を構築した。現在、膜画分からの抽出に最適な界面活性剤のスクリーニングを行っている。2)サルモネラ菌固定子蛋白質MotBのペリプラズム断片の結晶化我々は固定子複合体だけでなく、可溶性断片による部分構造の結晶化も進めてきた。特に固定子蛋白質MotBは、そのC末端側に固定に関わるペプチドグリカン結合モチーフを持ち、部分構造としても興味深い。サルモネラ菌を材料に、このモチーフを含む可溶性のMotB断片(MotB_c)を作成し解析した。MotB_cは野生株の運動能を低下させることから、野生型MotBとヘテロダイマーを形成し固定子複合体の集合を阻害するか、モーター中の固定子結合部位に作用していると予想され、またペリプラズムにおいて安定な二量体を形成していた(文献1)。MotB_cの精製は容易で、1リットル培養あたり25mg程度の精製標品が得られる。結晶化が難航したため、MotB_cのNMRスペクトル解析を行ったところ、N末端側とC末端側の構造が不安定であることが予想された。そこで、これら両末端を削った複数種のMotB_c断片を作成し結晶化条件を探索したところ、N末端を10残基、C末端を18残基欠失させた断片MotB_<c6>において、実験室でのX線回折実験で高い分解能の回折像を得ることができた。現在Spring-8での回折実験を目標とし、MotB_<c6>のセレノメチオニン置換体結晶を準備している。

1)The crystallization direction of PomA/PomB, the crystallization direction of PomA/PomB, The crystallization and fusion of PomA/PomB immobilized protein complexes were used in the construction of a large number of production systems for Escherichia coli in Na +-activated protein complexes. At present, the membrane separation and extraction of the most suitable interface active agent in the process of transformation. 2) Crystallization of a fragment of the immobilized protein MotB of a bacterium, and crystallization of a partial structure of the immobilized protein complex, a soluble fragment. In particular, the protein MotB is fixed on the C-terminal side of the protein. A soluble MotB fragment (MotB_c) was prepared for the analysis of the protein. MotB_c is expected to act as a barrier to the formation of a stationary complex and a stationary binding site in a wild type plant (Reference 1). MotB_c is easy to refine, and the refined standard of 25 mg can be obtained. Crystallization is difficult, MotB_c NMR analysis is difficult, N terminal side and C terminal side structure is unstable. The crystallization conditions of MotB_c fragments were explored. The N terminal residues were 10 residues, and the C terminal residues were 18 residues. The X-ray reflection of MotB_c fragments was obtained.<c6>Now Spring-8 is ready for the crystal of the replacement.<c6>

项目成果

The Vibrio motor proteins, MotX and MotY, are associated with the basal body of Na+-driven flagella and required for stator formation

• DOI: 10.1111/j.1365-2958.2006.05435.x
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: MOLECULAR MICROBIOLOGY
• 影响因子: 3.6
• 作者: Terashima, Hiroyuki;Fukuoka, Hajime;Homma, Michio
• 通讯作者: Homma, Michio

Crystallization and preliminary X-ray analysis of MotY,a stator component of the Vibrio alginolyticus polar flagellar motor

溶藻弧菌极鞭毛电机定子组件MotY的结晶和初步X射线分析

• 发表时间: 2007
• 期刊: Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 63
• 作者: Shinohara A;Sakuma M;Yakushi T;Kojima S;Namba K;Homma M;Imada K.
• 通讯作者: Imada K.

細菌べん毛モーター固定子タンパク質MotBのペリプラズム側断片の精製と結晶化

细菌鞭毛运动定子蛋白MotB周质片段的纯化和结晶

• 发表时间: 2007
• 作者: Terashima H;Fukuoka H;Yakushi;T;Kojima S;Homma M;小嶋誠司
• 通讯作者: 小嶋誠司

Systematic Cys mutagenesis of FlgI, the flagellar P-ring component of Escherichia coli.

• DOI: 10.1099/mic.0.2007/013854-0
• 发表时间: 2008-03
• 期刊: Microbiology (Reading, England)
• 作者: Hizukuri Y;Kojima S;Yakushi T;Kawagishi I;Homma M
• 通讯作者: Homma M

Characterization of the periplasmic domain of MotB and implications for its role in the stator assembly of the bacterial flagellar motor

• DOI: 10.1128/jb.01710-07
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF BACTERIOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Kojima, Seiji;Furukawa, Yukio;Narnba, Kelichi
• 通讯作者: Narnba, Kelichi