細菌べん毛モーターの回転子複合体と固定子複合体の結晶化

细菌鞭毛马达转子和定子复合物的结晶

• 批准号: 18054010
• 负责人: 小嶋 誠司
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18054010/
• 关键词: 蛋白質; 分子モーター; 生物物理; ナノマシン

1)海洋性ビブリオ菌極べん毛モーター固定子複合体PomA/PomBの結晶化へ向けた大量発現と精製細菌べん毛モーターのエネルギー変換機構を理解するためには、共役イオンの流入に共役したトルク発生を担う、固定子複合体の立体構造を解明することが必須である。我々はNa^+駆動型のビブリオ菌を材料に用い、PomA/PomB固定子複合体の結晶化に向けて、ヒスチジンタグを融合した複合体の大腸菌での大量発現系を構築した。現在、膜画分からの抽出に最適な界面活性剤のスクリーニングを行っている。2)サルモネラ菌固定子蛋白質MotBのペリプラズム断片の結晶化我々は固定子複合体だけでなく、可溶性断片による部分構造の結晶化も進めてきた。特に固定子蛋白質MotBは、そのC末端側に固定に関わるペプチドグリカン結合モチーフを持ち、部分構造としても興味深い。サルモネラ菌を材料に、このモチーフを含む可溶性のMotB断片(MotB_c)を作成し解析した。MotB_cは野生株の運動能を低下させることから、野生型MotBとヘテロダイマーを形成し固定子複合体の集合を阻害するか、モーター中の固定子結合部位に作用していると予想され、またペリプラズムにおいて安定な二量体を形成していた(文献1)。MotB_cの精製は容易で、1リットル培養あたり25mg程度の精製標品が得られる。結晶化が難航したため、MotB_cのNMRスペクトル解析を行ったところ、N末端側とC末端側の構造が不安定であることが予想された。そこで、これら両末端を削った複数種のMotB_c断片を作成し結晶化条件を探索したところ、N末端を10残基、C末端を18残基欠失させた断片MotB_<c6>において、実験室でのX線回折実験で高い分解能の回折像を得ることができた。現在Spring-8での回折実験を目標とし、MotB_<c6>のセレノメチオニン置換体結晶を準備している。

1) Marine antifungal agents are extremely sensitive to the crystallization of PomA/PomB fixtures. To detect a large number of fine bacteria, it is necessary to understand that co-workers and co-workers are involved in the production of health care, and that the three-dimensional construction of fixture complexes is necessary to understand that it is necessary to realize that it is necessary. We use Na ^ + kinematic material, PomA/PomB fixator fusion material and PomA/PomB fixator to crystallize the fusion compound, which contains a lot of bacteria. Now, the film painting is divided into several parts to extract the most active interface. 2) the protein of the immobilized protein of Fusarium spp. was crystallized and the soluble fragments were partially crystallized. 2) the protein MotB fragments were crystallized and the soluble fragments were partially crystallized. The protein MotB was specially immobilized, the C-terminal protein was immobilized, and the protein was immobilized at the C-terminal. The soluble MotB fragments (MotB_c) were made into analytical materials. The kinetic energy of MotB_c wild strain was low, and that of wild type MotB was low, and that of wild type MotBs was to form a set of fixed daughter to prevent damage. The role of the binding part of the fixator in the fish was not to be determined, and the two-dose system was formed (literature 1). MotB_c quality is easy, 1 is good, and the 25mg level is good. Results the results showed that there was no significant difference between the two groups in terms of MotB_c, MotB_c, C-terminal, and N-terminal. The crystallization conditions of the complex MotB _ c fragments were obtained by exploring the crystallization conditions, the N-terminal 10 residues, the C-terminal 18 residues, the MotB_<c6> fragments, the X-ray analysis and the high-resolution analysis. At present, the Spring-8 system is ready to improve the performance of the system, and the MotB_<c6> system is ready to improve the performance.

项目成果

The Vibrio motor proteins, MotX and MotY, are associated with the basal body of Na+-driven flagella and required for stator formation

• DOI: 10.1111/j.1365-2958.2006.05435.x
• 发表时间: 2006-11-01
• 期刊: MOLECULAR MICROBIOLOGY
• 影响因子: 3.6
• 作者: Terashima, Hiroyuki;Fukuoka, Hajime;Homma, Michio
• 通讯作者: Homma, Michio

Crystallization and preliminary X-ray analysis of MotY,a stator component of the Vibrio alginolyticus polar flagellar motor

溶藻弧菌极鞭毛电机定子组件MotY的结晶和初步X射线分析

• 发表时间: 2007
• 期刊: Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 63
• 作者: Shinohara A;Sakuma M;Yakushi T;Kojima S;Namba K;Homma M;Imada K.
• 通讯作者: Imada K.

Systematic Cys mutagenesis of FlgI, the flagellar P-ring component of Escherichia coli.

• DOI: 10.1099/mic.0.2007/013854-0
• 发表时间: 2008-03
• 期刊: Microbiology (Reading, England)
• 作者: Hizukuri Y;Kojima S;Yakushi T;Kawagishi I;Homma M
• 通讯作者: Homma M

細菌べん毛モーター固定子タンパク質MotBのペリプラズム側断片の精製と結晶化

细菌鞭毛运动定子蛋白MotB周质片段的纯化和结晶

• 发表时间: 2007
• 作者: Terashima H;Fukuoka H;Yakushi;T;Kojima S;Homma M;小嶋誠司
• 通讯作者: 小嶋誠司

Characterization of the periplasmic domain of MotB and implications for its role in the stator assembly of the bacterial flagellar motor

• DOI: 10.1128/jb.01710-07
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF BACTERIOLOGY
• 影响因子: 3.2
• 作者: Kojima, Seiji;Furukawa, Yukio;Narnba, Kelichi
• 通讯作者: Narnba, Kelichi