新規抗がん薬のデザイン、探索を目指した微小管プラス端集積因子の構造解析

微管加端积累因子的结构分析用于抗癌新药的设计和探索

• 批准号: 20011008
• 负责人: 三島 正規
• 金额: $ 6.27万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20011008/
• 关键词: 構造生物化学; 生物物理; NMR; 蛋白質; 生体分子; 微小管; 構造解析; 相互作用

細胞の運動や形態形成、分裂といった複雑な活動を担う微小管(μ,β-tubulin)は、極性のある繊維状の構造をとり、主にその伸長端(プラス端)において動的に伸長と短縮を繰り返す。CLIP-170やEB1は、微小管プラス端と直接結合し、その配向や伸長を制御し、細胞骨格の構築に非常に深く関わることが細胞生物学・生化学的研究から近年明らかになっており、我々が過去に行ったCLIP-170のCAP-Gly2ドメインとα-tubulinのC末端ペプチドの複合体の構造解析からCAP-Glyドメインの認識配列がEExEEY(coo-)であることが明らかになっている。本研究では、市販の低分子化合物で阻害剤候補を探索し、NMRを用いて結合実験を行った。十分に強くに結合する低分子の同定には至らなかったものの、芳香族性の化合物がCAP-Glyドメインと相互作用することを見出した。さらにある種のリン脂質がCAP-Glyドメイン結合し、その相互作用部位がα-tubulinのC末端ペプチドと拮抗する部位であることもNMRから明らかにした。またEB1のCHドメインの安定同位体ラベル体を調製し、結合実験を行ったところ、タキソールを用いて重合状態あるtubulinとは結合してNMR信号が消失したが、コルヒチンを用いて脱重合状態にあるtubulinとは相互作用せずNMR信号に変化はなかった。これは重合してできた繋ぎ目構造を認識するという説と一致する。さらには阻害剤デザインのための知見を得るため、転移交差緩和法を用いてCHドメインの微小管結合領域と結合に関与する残基の特定を試みた。

Cell movement and morphology, division and complex activity, microtubule (μ,β-tubulin), polarity and dimensional structure, main extension and contraction. CLIP-170 EB-1, microtubule, direct binding, alignment, elongation, cytoskeleton construction, cell biology and biochemistry research in recent years The structural analysis of the CAP-Gly-2 complex of CLIP-170 and α-tubulin in the past has been carried out. In this study, we explored the application of low molecular weight compounds in the market and their potential inhibitors. The interaction between CAP-Gly and CAP-Gly was found in aromatic compounds. In addition, there are several kinds of lipids, such as CAP-Gly, which bind to each other and interact with each other at the C-terminal of α-tubulin. The stable isotope of EB1 is modulated, combined, and used in the coincidence state. The NMR signal is disappeared. The tubulin interaction is used in the coincidence state. The NMR signal is changed. This is the first time I've ever seen such a thing. In this paper, we try to find out the specific residues of the microtubule binding domain in the middle of the reaction.

项目成果

Solution structure of the E.coli ribosome hibernation promoting factor HPF : Implications for the relationship between structure and function

大肠杆菌核糖体冬眠促进因子 HPF 的溶液结构：对结构与功能之间关系的影响

• 发表时间: 2009
• 期刊: Biochem.Biophys.Res.Commun. 389
• 作者: Akiko Sato;Takumi Watanabe;Yasushi Maki;Masami Ueta;Hideji Yoshida;Yutaka Ito;Akira Wada;Masaki Mishima
• 通讯作者: Masaki Mishima

溶液NMR法を用いたEB1とAPCの複合体の立体構造解析

溶液NMR法分析EB1与APC复合物的三维结构

• 发表时间: 2009
• 作者: 金場哲平;森智行;前崎綾子;伊藤隆;箱嶋敏雄;三島正規
• 通讯作者: 三島正規

Protein structure determination in living cells by in-cell NMR spectrescopy

通过细胞内核磁共振波谱测定活细胞中的蛋白质结构

• 发表时间: 2009
• 期刊: Nature 458
• 作者: Sakakibara;D.;et.al.
• 通讯作者: et.al.

EBIの構造解析

EBI结构分析

• 发表时间: 2008
• 作者: 崔 勝媛;玉置貴之，海老根一生;植村知博，上田貴志，中野明彦;早野龍五;Shimon Sakaguchi;金場哲平
• 通讯作者: 金場哲平

Transient structures of the cytoskeletal proteins revealed by NMR

核磁共振揭示细胞骨架蛋白的瞬时结构

• 发表时间: 2010
• 作者: Yurimoto;H.;神崎展;Shizuo Akira;坂口志文;藤本 優，海老根一生，丸山桃子，井坂奈々子，植村知博，石崎公庸，大和勝幸，河内孝之，中野明彦，上田貴志;三島正規
• 通讯作者: 三島正規