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油中水滴法で作成した分子モーター封入リポソームによる運動性人工細胞モデルの構築

使用油包水法创建的分子马达封装脂质体构建运动人工细胞模型

基本信息

批准号：
20034024
负责人：
瀧口金吾
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

アクチンをはじめとする細胞骨格ネットワークは、細胞の形態調節や運動発生に重要な役割を果たしている。その機構を明らかにするための構成的アプローチとして、内部に細胞骨格蛋白質を組み込んだ巨大リボソームの作成を通して、人工細胞運動モデル系を構築する試みがなされ、その成果として、リボソーム内にアクチンとアクチン線維束化蛋白質を封入しアクチンの束を重合形成させることによって、一定の形態をリボソームに誘導できることが明らかにされてきた。しかしNatural swellingやElectroformationなどの従来の巨大リボソーム調製法では、大きな蛋白質複合体を組込めない、生物に重要なMg^<2+>のような2価の陽イオンの存在下や生理的塩強度下では作成効率が落ちる、などの重大な問題があり、分子モーターの系への導入が困難だった。本研究ではそれらを克服するため、Spontaneous transfer法を利用することによって、任意の濃度のアクチンとHeavy meromyosin(HMM)を同時に組込んだ巨大リボソームを生理的な塩強度下で作製することに成功した。HMMはモータードメインを2個持ち、アクチン線維間に滑りを起こすことでアクチン線維の束を運動させることが出来る。分子モーターの駆動に必要なATPは、細菌由来の膜穿孔性毒素、α-Hemolysinを利用してリボソーム内に導入した。α-Hemolysinは脂質二重膜に侵入して7量体を形成し、ATPや小さなペプチドまでもが通過可能な直径が2nmを超えるチャネルを形成する。ATPの導入添加後、リボソーム内部で形成していたアクチン線維のネットワークが変形・再配置することを観察することに成功した。

This is an important part of the health care system, which is very important for the health of important workers. According to the information of the local government organization, the system of cellular osteoblasts, the internal cellular osteoblast protein, the giant bone marrow cells, the artificial mobile phones, the bone marrow cells, the bone protein, the bone protein, In the first place, the bundles of proteins were sealed and coincident with each other in order to form a correct configuration. This is very important to the Natural swelling Electroformation system. It is important to know that there are significant physiological problems, such as molecular weight, molecular weight and so on. In this study, we used the method of Spontaneous transfer to determine the physiological strength of a large animal by using the method of Heavy meromyosin (HMM), which can be used to measure the physiological strength of an animal. The HMM is responsible for the operation of the two maintenance stations and the operation of each other. ATP, bacterial origin, membrane perforating toxin and α-Hemolysin were necessary for molecular antigens. The α-Hemolysin lipid double membrane invaded into the body and the ATP was formed by the possibility that the diameter of the membrane was 2nm. After the ATP has been added, the internal configuration is successful.