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核周辺シグナル伝達基盤としての核孔透過性と内側核膜イオンチャネル

核孔通透性和内核膜离子通道作为核周信号转导的基础

基本信息

批准号：
20056003
负责人：
丸山芳夫
金额：
$ 3.01万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

目的:内外核膜はこれを貫く核孔とともに核信号伝達のための特殊な空間構造を形成している。これまで、外側核膜に存在するイオンチャネルを数種機能的に同定してきたが、内側核膜のイオンチャネルについては不明な点が多い。内側核膜標本の作製およびそのような標本でのイオンチャネルの同定を目的とした。方法:膵腺細胞からの核小胞体標本(核とそれを覆う核膜:nuclear envelope:NE)を対象とした。核小胞体標本を低浸透圧クエン酸ナトリウム溶液(10mM-Na-citrate溶液)中にて、室温、3-4時間の撹拌震盪、の処理を施し、外側核膜の除去を試みた。外側核膜の有無は、BODIPY-FL-Thapsigargin染色の可否で判定した。チャネルの検出にはpatch-clamp法を用いた。結果・考察:NE標本であり、数種のイオンチャネルがその表面(外側核膜)に存在した:1)200pS Maxi-K channel,2)80pS K-channel,3)30pS cation-channel,4)7pS Cl-channel,5)300pS IP3R-channel(type 3),6)55pS cADPR or NAADP-dependent channel。しかし、低浸透圧クエン酸ナトリウム処理後の、内側核膜と思われる標本からは顕著な背景イオンチャネルは検出されなかった。ただ、数例において、inside/out後、IP_3(10μM)を標本チャンバーに投与すると特有のチャネル活動(Na透過性)が観察された,,この結果は、内側核膜にはIP_3受容体チャネルが核質に向かって存在することが示唆された。

Objective: to detect the nuclear signal of the inner and outer nuclear membrane and the formation of a special space device. In both nuclear and external nuclear membranes, there are several mechanisms that are the same as those in the nuclear membrane, and there are many points in the nuclear membrane. The inner nuclear membrane header is used for the purpose of the same purpose. Methods: the small nucleosome marker (nuclear membrane: nuclear envelope:NE) was detected in the glandular cells. The nucleosome marker was low-permeable in 10mM-Na-citrate solution, which was incubated at room temperature for 3-4 hours, subjected to shock, incubation and extranuclear membrane filtration. The outer nuclear membrane is not clear, and BODIPY-FL-Thapsigargin staining can determine whether it is possible to detect it. Please tell me how to use patch-clamp method. Results: the results showed that there were some defects on the surface (outer nuclear membrane) of NE tags: 1) 200pS Maxi-K channel,2) 80pS Kmuri channel 3) 30pS cation-channel,4) 7pS Cl-channel,5) 300pS IP3R-channel (type 3), 6) 55pS cADPR or NAADP-dependent channel. After the treatment of low-permeability, low-permeability, low-permeability, After several experiments, after inside/out, the IP_3 (10 μ M) flag and the specific activity (Na permeability) of the device were tested, and the results, the IP _ 3 acceptor of the internal nuclear membrane and the recipient of the internal nuclear membrane were detected.