細胞ファイバー系のin vivoアッセイ

细胞纤维系统体内测定

• 批准号: 10877005
• 负责人: 丸山 芳夫
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877005/
• 关键词: 膵腺腺房細胞; オイルスキン法; 小胞体; 核; K_+チャネル; 肝細胞; Cl-チャネル; パッチクランプ法; オイルスキン; フシファーイエロー; 膵腺房細胞

I)膵腺腺房細胞にオイルスキン操作を施し、親水性蛍光試薬(ルシファーイエロー)を与えると、10分の経過で標本はほぼ均等に染色される。スキン後、オイル層存在下、進展は1〜2分の経過を経て完成する。水系とオイル系の力学的バランスにより、ほぼ同心円状の標本が得られる。この状態で、親水性蛍光試薬(Lucifer Yellow)を標本に与えると、核が明瞭に染色され、その周りに非染色領域をもつ像が得られる。この非染色領域は小胞体と推測される。細胞質はまばらに染色され、膵腺腺房細胞に特有のチモーゲン顆粒は消失している。このように、標本は細胞膜を持たず、細胞質と核内との交通を保ち、その周りに管腔空間(小胞体)を有している。オイルを除去し、水系のみにて進展をみると、1〜2時間の経過で、小胞体空間の進展膨潤による不定の膜膨潤あるいはブレッブの形成進展がある。これらの基本的知見をふまえ、次の実験系の確立を目指した。パッチクランプ法を適用し、核と小胞体膜が区別されることから部位をある程度特定しつつ、小胞体膜上のイオンチャネルを見いだすことである。従来、小胞体膜上のチャネルは、カエル卵細胞を除いて、核標本に付着する小胞体膜でのみ行われていた。ほ乳類体細胞系での小胞体膜チャネルでは、筆者によるK_+チャンルの同定のほかに報告がない。しかし、Ca2_+シグナルを検討する場合、この核周囲小胞体膜のみの情報では不十分である。スキン法による本標本は、その保持しうる小胞体膜の大きさから他の小胞体特殊部位を含み、シグナルに直接関わる小胞体膜機能の解析に供することができる。II)いっぽう、肝細胞の小胞体膜は大部分滑面であるとされ、膵腺腺房細胞のそれと異なる。オイルスキン法を適用し、パッチクランプ法により、600pSほどのCl-チャネルが肝小胞体膜に存在することが確かめられた。

I) room Cui gland gland cells に オ イ ル ス キ ン operation を the し, hydrophilic 蛍 light try 薬 (ル シ フ ァ ー イ エ ロ ー) を and え る と, 10 points の 経 で specimen は ほ ぼ equal に dyeing さ れ る. After スキ て, with the presence of the <s:1> <s:1> layer, progress is carried out for スキ 1 to 2 minutes, <s:1> passes through を and て to complete する. The バラ スによ スによ of the <s:1> system of <s:1> mechanics and the ほぼ concentric ron-shaped <s:1> specimens が obtain られる. こ の で, hydrophilic 蛍 light try 薬 (Lucifer Yellow) に を specimen and え る と, nuclear が clear に dyeing さ れ, そ の weeks り に of dyeing fields を も つ as が ら れ る. The <s:1> non-staining domain と small cell body と is presumed to be される. The cytoplasm is まばらに まばらに stained され and 膵. The adenocarcinoma に is specific to the <s:1> チモ ゲ ゲ ゲ <s:1> granule <e:1> disappears and the て て る る る る る る is lost. こ の よ う に, specimen は membranes を た ず, cytoplasm と nuclear と の traffic を ち, そ の weeks り に lumen space (small cell body) を have し て い る. オ イ ル を remove し, drainage の み に て progress を み る と, 1 ~ 2 time の 経 で, small cell body space の progress swelling に よ る indefinite の membrane swelling あ る い は ブ レ ッ ブ の formation progress が あ る. The basic knowledge of た, the secondary knowledge of を, the establishment of を, the goal of た. パ ッ チ ク ラ ン プ を applicable し, small nuclear と cell body membrane が difference さ れ る こ と か ら parts を あ る degree of specific し つ つ, small cell body membrane の イ オ ン チ ャ ネ ル を see い だ す こ と で あ る. 従 to, small cell body membrane の チ ャ ネ ル は, カ エ ル egg を except い て, nuclear specimens に pay the す る small cell body membrane で の み line わ れ て い た. ほ breast kind somatic system で の small cell body membrane チ ャ ネ ル で は, the author に よ る K_ + チ ャ ン ル の with fixed の ほ か に report が な い. The information on the 囲 cell body membrane of the <s:1> <s:1> nuclear perinuclear 囲 cells で み is not very である. ス キ ン method に よ る は this specimen, そ の keep し う る small cell body membrane の big き さ か ら he の を み, a special cell body parts シ グ ナ ル に directly masato わ る analytical に for small cell membrane function の す る こ と が で き る. II) っぽう っぽう, most of the smooth surface of the body membrane of the liver cell <s:1> small cells であるとされ, 膵 adenocarcinoma cells <s:1> それと abnormal なる. オ イ ル ス キ ン を applicable し, パ ッ チ ク ラ ン プ method に よ り, 600 ps ほ ど の Cl - チ ャ ネ ル が exist small hepatic cell membrane に す る こ と が か indeed め ら れ た.

项目成果

Ken-ichirou Morishige,etc.: "Secretagogue-induced Exocytosis Recruits G Protein-gated K+ Channels to Plasma Membrane in Endocrine Cells"The Journal of Biological Chemistry. 274(12). 7969-7974 (1999)

Ken-ichirou Morishige 等：“促分泌素诱导的胞吐作用将 G 蛋白门控 K 通道招募到内分泌细胞的质膜”生物化学杂志。

丸山 芳夫・王 文輝: "電気的解析法(膜容量計測法およびカーボン線維電極による計測)" 蛋白質 核酸 酸素. 43(12). 1770-1776 (1998)

Yoshio Maruyama和Wenhui Wang：“电分析方法（膜电容测量方法和使用碳纤维电极的测量）”Protein Nucleic Acids Oxygen 43（12）1770-1776（1998）。