カエル卵細胞へのmRNA注入による光受容分子の電気生理学的研究

将 mRNA 注射到青蛙卵细胞中进行光感受器分子的电生理研究

基本信息

  • 批准号:
    62621507
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1987
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1987 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

アフリカツメガエル卵母細胞に夜行性動物の網膜から抽出したmRNAを注入すれば, 視細胞に存在し光受容に関与している物質が翻訳, 発現されると予想される. この様にして発現された光受容分子の機能を主に電気生理学的方法を用いて検討するための卵母細胞によるmRNA翻訳システムを作製する事が今年度の目標であった. まず卵母細胞の電気生理学的記録・測定システムを今年度予算で購入したコンピューター, A-Dコンバーターと現有する微小電極用増幅器および膜電位固定用増幅器とを接続して組み立て, 実験制御およびデーター記録を行うプログラムを開発した. 次に, mRNA注射実験にさきだちシステムのシストをかねて卵母細胞自身の電気的性質や培養条件を求める実験を開始した. 日本産のツメガエルは機械的外傷に弱かったので摘出方法を機械的なものからコラゲナーゼをもちいた方法に変更した. 卵母細胞培養液として広く使用されているBarth液を単離直後より使用しても膜電位, 膜抵抗を保つことはできなかったので培養方法についても検討を加えた結果2〜3日間は卵母細胞を培養できるようになった. そこで, 50羽のヒヨコ網膜よりmRNAをグアニジンSCN法で抽出し, 試作した微量注射装置で卵母細胞一個あたり50nlづつ注射した後24時間培養したところ, 視細胞からの光情報伝達に関与している神経伝達物質の一つであるγ-アミノ酪酸(GABA)に対する応答が出現した. 投与されたGABAの濃度に応じて卵母細胞は膜抵抗の減少を伴った脱分極をしめした. この応答の逆転電位は-20mVであった. また, 応答の振幅がGABA投与開始直後に最大となった後指数関数的に減少し数分以内にほぼ消失する特微的な脱感作が観察された. このような応答の特性は, 以前から中枢細胞系で知られていたGABA受容体の性質と一致する. このように今年度作製したmRNA翻訳システムは予定どおり作動し, 正常に機能する受容体タンパクを卵母細胞の上に再構成する事ができることがわかった.
Oocytes from nocturnal animals are injected with mRNA, and the presence of light receptors and substances in the oocytes is expected to occur. The aim of this study is to investigate the role of photoreceptors in oocytes by electrophysiological methods. The recording and measurement of the electrophysiology of oocytes are expected to be purchased this year, and the amplifier for microelectrodes and the amplifier for membrane potential fixation are connected to the existing amplifier for microelectrodes and the amplifier for membrane potential fixation. Next, mRNA injection was initiated to determine the electrical properties of the oocytes themselves and culture conditions. Japan's production of Oocyte culture medium and Barth solution were used in isolation, membrane potential and membrane resistance were used in isolation, and oocyte culture method was used in isolation. The 50-day microinjection device was used to extract the mRNA from oocytes by SCN method. After 50-day microinjection, the oocytes were cultured for 24 hours. The optical information of the oocytes was detected by γ-aminobutyric acid (GABA). The concentration of GABA in oocytes decreased with depolarization. The reverse potential of the voltage is-20mV. The amplitude of GABA decreased within a few minutes after the onset of the maximum exponent, and the amplitude of GABA disappeared within a few minutes. The properties of GABA receptors are consistent with those of the central cell line. This is the first time that the gene expression system has been programmed to function normally, and the receptor has been reconstructed from the oocyte.

项目成果

期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
安藤 啓司: 日本生理学雑誌.
安藤敬二:日本生理学杂志。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
安藤 啓司: Neuroscience Research.
安藤敬二:神经科学研究。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ journalArticles.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ monograph.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ sciAawards.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ conferencePapers.updateTime }}

{{ item.title }}
  • 作者:
    {{ item.author }}

数据更新时间:{{ patent.updateTime }}

安藤 啓司其他文献

安藤 啓司的其他文献

{{ item.title }}
{{ item.translation_title }}
  • DOI:
    {{ item.doi }}
  • 发表时间:
    {{ item.publish_year }}
  • 期刊:
  • 影响因子:
    {{ item.factor }}
  • 作者:
    {{ item.authors }}
  • 通讯作者:
    {{ item.author }}

相似海外基金

Characterization of how mRNA translation influences reproductive aging
mRNA 翻译如何影响生殖衰老的表征
  • 批准号:
    10665757
  • 财政年份:
    2022
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Characterization of how mRNA translation influences reproductive aging
mRNA 翻译如何影响生殖衰老的表征
  • 批准号:
    10537634
  • 财政年份:
    2022
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Pseudouridine-mediated branch site recognition/selection during pre-mRNA splicing
前 mRNA 剪接过程中假尿苷介导的分支位点识别/选择
  • 批准号:
    10383755
  • 财政年份:
    2020
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Pseudouridine-mediated branch site recognition/selection during pre-mRNA splicing
前 mRNA 剪接过程中假尿苷介导的分支位点识别/选择
  • 批准号:
    10612829
  • 财政年份:
    2020
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Pseudouridine-mediated branch site recognition/selection during pre-mRNA splicing
前 mRNA 剪接过程中假尿苷介导的分支位点识别/选择
  • 批准号:
    10231213
  • 财政年份:
    2020
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Pseudouridine-mediated branch site recognition/selection during pre-mRNA splicing
前 mRNA 剪接过程中假尿苷介导的分支位点识别/选择
  • 批准号:
    10026485
  • 财政年份:
    2020
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Mechanisms driving the transition from oocyte to embryo: The role of the mRNA decay activator ZFP36L2
驱动卵母细胞向胚胎转变的机制:mRNA 衰变激活剂 ZFP36L2 的作用
  • 批准号:
    10408761
  • 财政年份:
    2018
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Mechanisms driving the transition from oocyte to embryo: The role of the mRNA decay activator ZFP36L2
驱动卵母细胞向胚胎转变的机制:mRNA 衰变激活剂 ZFP36L2 的作用
  • 批准号:
    10164802
  • 财政年份:
    2018
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Mechanisms driving the transition from oocyte to embryo: The role of the mRNA decay activator ZFP36L2.
驱动卵母细胞向胚胎转变的机制:mRNA 衰变激活剂 ZFP36L2 的作用。
  • 批准号:
    10388655
  • 财政年份:
    2018
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
Producing, provisioning, and protecting the egg: Regulation of DNA replication, mRNA translation, and proteolysis for the transition from oocyte to embryo
卵子的生产、供应和保护:从卵母细胞到胚胎过渡的 DNA 复制、mRNA 翻译和蛋白水解的调节
  • 批准号:
    9253418
  • 财政年份:
    2016
  • 资助金额:
    $ 0.64万
  • 项目类别:
{{ showInfoDetail.title }}

作者:{{ showInfoDetail.author }}

知道了