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ペプチド核酸型蛍光プローブを用いた生体中遺伝子発現の定量化に関する研究

利用肽核酸荧光探针定量体内基因表达的研究

基本信息

批准号：
15011250
负责人：
池田壽文
金额：
$ 3.52万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15011250/
关键词：
可視化ナノバイオ核酸細胞・組織発現制御

项目摘要

本研究者は、新規に開発した細胞膜透過性蛍光PNAプローブを用いた生細胞中に発現しているmRNAの逐次定量法の開発を目指した。(1)特定遺伝子に対応した細胞膜透過性蛍光PNAプローブの合成に成功した。既に特許出願した蛍光PNAユニットを利用して、細胞膜透過性蛍光PNAプローブを合成した。合成は現有設備の半自動固相有機合成装置を用いて行い、粗生成物は現有設備のHPLCにより精製した。蛍光標識化PNAプローブの構造はMALDI-TOF MSにより決定した。(2)細胞膜透過性蛍光PNAプローブの生細胞への導入実験を行った。モデル系として、既に実験系を確立している神経細胞を用いた。設計した蛍光PNAプローブを用いて、様々な条件(反応温度や時間)下でFISHを行った。この際、現有設備である蛍光顕微鏡を用いた。その結果、前処理や後処理を必要としない検出感度のよいPNAプローブの設計ができた。(3)新規FISH法の確立を行った。別プロジェクトで開発した「検出装置DD Scan?」を用いて、遺伝子発現量の定量化を目指した。今回、PNAプローブではなく蛍光標識化合物を用いて、当該実験を行ったところ、複数PNAプローブを用いた遺伝子発現量の定量化が可能であることを証明した。以上、当初予定していた研究目的は達成できた。今後、実際に「検出装置DD Scan?」と複数プローブを用いて、生細胞中の遺伝子発現量の定量化する方法を確立したい。

The authors propose a new method for the development of a sequential quantitative method for the detection of mRNA in living cells using cell membrane permeable fluorescent PNA. (1)The synthesis of PNA with specific protein was successful. In addition to the special permission, the cell membrane permeability of PNA can also be used. The synthesis was carried out by using existing equipment and semi-automatic solid phase organic synthesis equipment, and the crude product was purified by HPLC with existing equipment. The structure of PNA is determined by MALDI-TOF MS (2)Cell membrane permeability PNA The system was established in the middle of the brain. The design is based on the use of fluorescent PNA plugs and FISH can be performed under different conditions (reverse temperature and time). At this time, the existing equipment is equipped with a light microscope. The results, pre-processing and post-processing are necessary to detect the sensitivity of the PNA. (3)The new FISH method was established. Please click here to open "DD Scan?" The quantitative analysis of gene expression and gene expression in human body This paper proves that it is possible to quantify the amount of PNA photo-labeled compounds when they are used. The purpose of this study was achieved. In the future, in practice,"DD Scan?" A method for quantification of gene production in living cells has been established.