γセクレターゼにおけるニカストリンとプレセニリン相互作用の細胞生物学的解析

尼卡斯特林和早老素在γ-分泌酶中相互作用的细胞生物学分析

• 批准号: 15016015
• 负责人: 荒若 繁樹
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Yamagata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016015/
• 关键词: 細胞・組織; 神経科学; 蛋白質; 痴呆; 脳神経疾患

I型膜タンパク質と推定されているニカストリン(NCT)は、プレセニリン(PS)高分子複合体構成因子のひとつであり、gammaセクレターゼ活性に必要である。NCTの機能として、全長型PSの安定性に寄与することが報告されている。本研究では、NCTがどのようにPS複合体へ重合していくのかを調べるため、PSとの結合に関与するNCTドメインについて検討した。方法として、NCTと同じI型膜タンパク質で糖鎖修飾を受けるアミロイド前駆体タンパク質(APP)とNCTのキメラ変異体を作成した。NCT/APPキメラをHEK293細胞に過剰発現させて、PSとの結合を生化学的に調べた。結果として、Endo-Hを使用した実験よりキメラ変異体はすべて野生型NCT、APPで認められるような成熟型の糖鎖修飾を受け、小胞体からゴルジ装置へ輸送されていることを確認した。次に、免疫沈降法による実験より、PS1-N末端断片との結合は、NCT細胞質ドメインを置換したキメラで、ほぼ野生型NCTと同様の結合を示し、NCT管側ドメインを置換したキメラでは、PS1-N末端断片との結合が減弱している所見を得た。一方、このNCT管側ドメインを置換したキメラでは、全長型PS1との結合は保たれていた。NCT管側ドメインと膜貫通ドメインは、PS1-N末端断片との結合に関与することが示された。全長型PS1との結合には、膜貫通ドメインが関与していることが示唆された。NCTは、PS1との重合過程において各ドメイン毎に機能的役割が異なっている可能性が考えられた。

Type I membrane properties are estimated to be essential for the activity of NCT (NCT), PS (PS) polymer complex components. The function of NCT and the stability of full-length PS are reported in this paper. In this study, the relationship between PS complex and NCT was discussed. Methods: NCT and I-type membrane were prepared by the same method as APP and NCT. NCT/APP is the key to the development of HEK293 cells, and PS is the key to biochemical regulation. Results: Endo-H was used to determine whether the wild-type NCT and APP had been modified by the mature glycan, and whether the micro-cell had been modified by the device. In addition, immuno-sedimentation method was used to detect the binding of PS1-N-terminal fragment, NCT cytoplasmic substitution, wild-type NCT binding, NCT tube-side substitution, and PS1-N-terminal fragment weakening. A side, NCT tube side, side. NCT tube side surface and membrane penetration surface, PS1-N terminal fragment and binding surface The full-length PS1 has a combination of membrane and membrane penetration. NCT, PS1 and the overlap process, each function of the service division is different from the possibility of examination.

项目成果

Wada M: "A human granin-like neuroendocrine peptide precursor (proSAAS) immunoreactivity in tau inclusions of Alzheimer's disease and parkinsonism-dementia complex on Guam."Neurosci Lett. 356. 49-52 (2004)

Wada M：“关岛阿尔茨海默氏病和帕金森痴呆症复合体的 tau 蛋白包涵体中存在人粒蛋白样神经内分泌肽前体 (proSAAS) 免疫反应性。”Neurosci Lett。

Kikuchi K: "An N-terminal fragment of ProSAAS (a granin-like neuroendocrine peptide precursor) is associated with tau inclusions in Pick's disease."Biochem Biophys Res Commun. 308. 646-654 (2003)

Kikuchi K：“ProSAAS（一种粒蛋白样神经内分泌肽前体）的 N 末端片段与皮克氏病中的 tau 蛋白内含物有关。”Biochem Biophys Res Commun。

Chen F: "Presenilin 1 and presenilin 2 have differential effects on the stability and maturation of nicastrin in Mammalian brain."J Biol Chem. 278. 19974-19979 (2003)

Chen F：“早老素 1 和早老素 2 对哺乳动物大脑中尼卡斯特林的稳定性和成熟具有不同的影响。”J Biol Chem。