αCaMKII mRNAのシナプス局在が脳の機能発現に果たす役割の解明

阐明αCaMKII mRNA突触定位在脑功能表达中的作用

• 批准号: 15016072
• 负责人: 森 泰丈
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016072/
• 关键词: mRNA; 局所蛋白質合成; αCaMKII

我々は樹状突起に局在するmRNAのうちCa2+/Calmodulin-dependent protein kinase II alpha-subunit(alpha-CaMKII)mRNAに注目し、樹状突起へ輸送されるためのシグナルとして3'非翻訳領域の30残基が必要不可欠であり、この配列が樹状突起への輸送を可能にするシス配列であることを証明した。次にこの輸送メカニズムを明らかにする目的で、シス領域に結合する蛋白因子の同定をおこなうことにした。既に^<32>Pで放射性ラベルしたシス領域を含む配列を用いて結合アッセイをおこなった結果、ラット脳ホモジネート中にこの配列と特異的に結合する約55kDa蛋白質が存在することを明らかにした。しかし、ラット大脳の細胞質分画であるS3フラクションをゲル濾過カラム、MonoQカラムで部分精製したところ、シス領域と結合活性を示したのは約42kDaと30kDaの2本のバンドであった。さらにポリウリジル酸固定化セファロースに吸着させたアフィニティーカラムを作製し、シス領域に結合する蛋白質の精製をおこなった。このカラム内でRNAプローブと部分精製したラット大脳の細胞質分画を反応させた後、1-2M KClの濃度勾配で溶出される蛋白質を回収し、各分画をSDS-PAGEで泳動した。すると1MのKCl溶出されてきた分画中に42kDaの分子量を示す蛋白質のバンドが検出された。この蛋白質をさらに2次元等電点電気泳動で分離し、独立した1つの蛋白質のスポットであることを確認し、このスポットをゲルから切り出し、蛋白質の部分配列の決定をおこなった。

This paper demonstrates that the 30 residues in the tree-dependent mRNA Ca2 +/Calmodulin-dependent protein kinase II alpha-subunit(alpha-CaMKII) are necessary for tree-dependent transport. The purpose of this study is to determine the identity of protein factors in the context of transport. The <32>presence of a 55kDa protein in the radioactive domain, including the alignment of the protein, results in the alignment of the protein and the specific binding of the protein. Cytoplasmic analysis of the protein showed that the protein was partially purified and the binding activity was about 42kDa and 30kDa. The purification of protein in the immobilized protein domain The protein was eluted by SDS-PAGE after 1-2M KCl concentration matching. The molecular weight of 42kDa protein was shown in the analysis of 1M KCl dissolution. 2-D isoelectric point electrophoresis of protein is used to separate, separate and determine protein partial alignment.