腸管出血性大腸菌O157:H7に対する植物ワクチン効果の解析

植物疫苗对肠出血性大肠杆菌O157:H7的功效分析

• 批准号: 15019131
• 负责人: 柳原 格
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Maternal and Child Health
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019131/
• 关键词: 腸管出血性大腸菌; 植物ワクチン; ミヤコグサ

腸管出血性大腸菌(EHEC主にO157:H7)感染症は、小児、老人などの免疫力の低下したヒトに多く発症し、死亡例が後を絶たない。本感染症は、発症菌量が数十個とされ極少量で重篤な症状を起こし、無症状キャリアー成人からの家族内感染が多く報告され、感染経路の特定が困難な場合が多い。EHECによる感染症はいまや日本中で集団感染、弧発例が見られその感染経路も多様化している。本菌のキャリアーは家畜、特にウシとされている。いまや世界中に蔓延している人畜共通感染症である本症を撲滅するには、ヒトおよび飼育されているウシからの本菌の排除が必要である。ところが、ウシが飼育されている国は世界中に及び、また、ワクチンなどの投与が経済的に不可能な地域が多く含まれる。そこで、安価に栽培でき、ヒトおよび家畜に経口摂取可能な植物ワクチンが有用であると考える。EHEC(O157:H7 Sakai株)由来のタイプIII分泌機構に関連するEspA,EspB,intimin、及びベロ毒素Bサブユニットをコードする遺伝子を用いて12種類の発現ベクターを構築し、日本固有のマメ科植物ミヤコグサに導入した。約600本のシュートの中からPCRによるスクリーニングで298個体の形質転換体を選択した(T_0)。遺伝子導入が確認された8種類の再生個体を育成し、221個体から各々のT_1種子を採取、ベクターの種類ごとに100個体(計800個体)の種子を播種した。一般的に植物においては複数コピーの外来遺伝子が導入されている場合RNAiによるpost transcriptional gene silencingが起こる。そこでT_1個体の一部を用いてSouthern blotなどを行ない、単一コピーの遺伝子が挿入されている13個体を選別した。これらの13個体中T_17個体を育成した結果、T_2計89個体を得た。今後、小動物においてワクチン効果を解析していく。

Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC O157:H7) infection, small children, elderly people, low immunity, many cases of disease, death after a few cases The number of bacteria present in this infection is several dozen, a very small number, severe symptoms, asymptomatic adults, familial infections, and specific difficulties in the infection pathway. EHEC infection in Japan is concentrated in infection, and cases are found in the infection pathway. The bacteria are isolated from livestock, especially from animals. Zoonotic infections are spreading throughout the world, and elimination of zoonotic infections is necessary. In the world, the number of animals and plants in the world is not enough. The plant is cultivated, cultivated, and cultivated. EHEC(O157:H7 Sakai strain) is derived from EspA,EspB,Intimin, and Toxin B, which are related to the secretion mechanism of EspA,EspB,Intimin, and Toxin B. Among the 12 species of EspA,EspB,Intimin, and Toxin B, EspA,EspB, EspB, EspA, EspB, EspA, EspB, EspB About 600 samples were selected from 298 samples (T_0). 8 species of regenerated individuals were identified and 221 individuals were selected and 100 individuals (800 individuals) were seeded. In general, the introduction of foreign genes into plants may result in post transcriptional gene silencing. A part of the T_1 individuals were identified by Southern blot. A part of the T_1 individuals were identified by Southern blot. Among the 13 individuals, T_17 individuals were bred and 89 individuals were obtained from T_2. From now on, small animals will be analyzed.

项目成果

Kumazaki K, Nakayama M, Yanagihara I, et al.: "Immunohistochemical distribution of Toll-Like Receptor 4 in term and preterm human placentas from normal and complicated pregnancy including chorioamnionitis"Human Pathology. 35・1. 47-54 (2004)

Kumazaki K、Nakayama M、Yanagihara I 等：“Toll 样受体 4 在正常和复杂妊娠的足月和早产人类胎盘中的免疫组织化学分布，包括绒毛膜羊膜炎”人类病理学 35・1（2004 年）。

Hamada D, Yanagihara I, Tsumoto K.: "Engineering amyloidogenicity towards the development of nanofibrillar materials"TRENDS in Biotechnology. 22・2. 93-97 (2004)

Hamada D、Yanagihara I、Tsumoto K.：“利用工程淀粉样蛋白来开发纳米纤维材料”生物技术趋势 22・2（2004 年）。

Yamada M, Hamada D, Yanagihara I, et al.: "Analysis of recombinant human Saposin A expressed by Pichia pastoris"Biochemical and Biophysical Research Communications. (In press). (2004)

Yamada M、Hamada D、Yanagihara I 等人：“巴斯德毕赤酵母表达的重组人皂苷 A 的分析”生物化学和生物物理研究通讯。

Greene LH, Hamada D, Eyles SJ, Brew K: "Conserved signature proposed for folding in the lipocalin superfamily"FEBS letters. 553. 39-44 (2003)

Greene LH、Hamada D、Eyles SJ、Brew K：“建议在脂质运载蛋白超家族中折叠的保守签名”FEBS 字母。

Tansengco ML, Hayashi M, Murooka Y, et al.: "Crinkle, a novel symbiotic mutant that affects the infection thread growth and alters the root hair, trichome, and seed development in Lotus japonicus"Plant Physiology. 131・3. 1054-1063 (2003)

Tansengco ML、Hayashi M、Murooka Y 等人：“皱纹，一种影响感染线生长并改变莲花根毛、毛状体和种子发育的新型共生突变体”植物生理学 131・3。 1063 (2003)