核構造とRNA輸送の分子制御

核结构和 RNA 运输的分子控制

• 批准号: 15030236
• 负责人: 斉藤 寿仁
• 金额: $ 4.1万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15030236/
• 关键词: SUMO; 翻訳後修飾; 核輸送; 核膜孔; シグナル伝達; シャペロン; 酵素; ユビキチン; RNA輸送; 核構造; IGC; c-fos; 転写; スプライシング

細細胞の核内構造が転写を代表する核内反応の制御に関わる例が近年数々報告されている。本研究ではIGCの構成成分とRNA転写およびスプライシング、mRNA輸送に関わる機序と、核膜孔の細胞質フィラメント構成因子であるSUMO E3リガーゼRanBP2に焦点を当て、核膜孔におけるRNAの輸送と翻訳後修飾因子SUMOの役割を明らかにすることを目的として研究を推進し、以下の結果を得た。1.SUMO結合タンパク質の解析:大腸菌体内でSUMO化タンパク質を大量に合成するシステムを完成させた。酵母2ハイブリッド法によりSUMO化タンパク質結合因子STIPsを複数同定し、大腸菌システムによるリコンビナントSUMO化タンパク質を用いた解析を行った。STIP3はRNA結合タンパク質であり、SUMOがSTIP3との相互作用を介して核内RNAの動態制御に関わるというモデルを提案した。2.in situ SUMO化反応とRNAiによるSUMO化システムの解析:SUMO化反応と核内構造、および生体分子輸送の解析をセミインタクト細胞において解析する技術を確立した(in situ SUMo化反応系)。こうした新技術と、RNAi法を組み合わせることで、SUMO化システムとIGC、核膜孔の構築メカニズム、そして核膜孔におけるSUMO化およびRanBP2-E3活性生理的な意義を解析した。3.RanBP2のsiRNAによるノックダウン効果の解析:RanBP2のsiRNAにより,細胞内のRanBP2を約80%ほどノックダウンすることに成功した。RanBP2ノックダウン細胞において、ポリA-RNAの核内における蓄積をポリAのin situ hybridization反応を用いて観察したのと同時に、IGC核スペックルの構成因子の局在異常を免疫染色法により検出した。核膜孔タンパク質や核ラミナの構造には変化が見られなかったことから、この結果は、RanBP2の機能破綻が直接的にRNA輸送及び核構造の制御に関わることを示していると考えられた。

In recent years, there have been several reports on the number of reports that have been reported in recent years. In this study, the components of IGC, RNA, mRNA, SUMO E3, RanBP2, and SUMO were analyzed. The results showed that the results of the study were improved, and the following results were obtained. The analysis of 1.SUMO combined with DNA sequencing showed that there were a large number of synthetic bacteria in the body of SUMO. The method of yeast 2

项目成果

Y.Uchimura: "Overproduction of Eukaryotic SUMO-1- and SUMO-2-conjugated Proteins in Escherichia coli"Anal.Biochem.. (in press). (2004)

Y.Uchimura：“大肠杆菌中真核 SUMO-1 和 SUMO-2 缀合蛋白的过量生产”Anal.Biochem..（出版中）。

Noncovalent SUMO-1 binding activity of TDG is required for its SUMO-1 modification and colocalization with PMI

TDG 的 SUMO-1 修饰和与 PMI 的共定位需要 TDG 的非共价 SUMO-1 结合活性

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Biological Chemistry (in press)
• 作者: Pichler;A.;Knipscheer;P.;Saitoh;H.;Sixma;T.K.;Melchior;F.;H.Takahashi
• 通讯作者: H.Takahashi

ユビキチンファミリーの制御機構

泛素家族的调控机制

• 发表时间: 2004
• 期刊: 医学のあゆみ 211
• 作者: Pichler;A.;Knipscheer;P.;Saitoh;H.;Sixma;T.K.;Melchior;F.;H.Takahashi;Y.Uchimura;Y.Uchimura;内村康寛
• 通讯作者: 内村康寛

タンパク質ポリマー及びその購法

蛋白质聚合物及其购买方法

• 发表时间: 2003

K.Matsuzaki: "PML-nuclear bodies are involved in cellular serum response."Genes to Cells. 8. 275-286 (2003)

K.Matsuzaki：“PML 核体参与细胞血清反应。”基因到细胞。