臨床応用を見据えた大腸癌幹細胞の新規分離法の確立と治療抵抗性機構の解明

建立结直肠癌干细胞新分离方法并阐明治疗耐药机制以期临床应用

• 批准号: 15K19883
• 负责人: 北原 知洋
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19883/
• 关键词: 癌幹細胞; CD107a; 抗癌剤耐性; 未分化

今回我々が同定した新規のマーカー(CD107a)に関して臨床検体を用いた免疫染色にてその発現形式を調べた。正常な大腸上皮と比較し、癌細胞では強い染色が認められた。正常な大腸上皮では特徴的に陰窩の底部にCD107a陽性細胞が存在した。中分化腺癌の症例では細胞内の基底膜側が弱く染色された。一方中分化腺癌でも腺管の極性を失い一部未分化な成分を含んだ部分や癌の浸潤の先進部では細胞膜が強く染色された。術前化学療法を行った症例では細胞内が強く染色された。また同一の症例で化学療法を行う前に生検を行った検体と化学療法後に採取した検体を染色して比較してみたが、同様の結果が得られた。以上の結果よりこのマーカーの発現は癌の分化度と関連すること（未分化な症例でより強く発現すること）及び化学療法と関連すること（化学療法後は強発現すること）が示唆された。次に今回同定したCD107aを高発現している大腸癌の細胞株(CaCO2)を用いてsiRNAによるCD107aのknockdownを行った。knockdown後にフローサイトメトリーにてknockdown効率を確認した。まず細胞増殖を検討するとCD107aをtargetとするsiRNAをトランスフェクションさせた群の方がコントロールsiRNA群と比較して、増殖が優位に抑制された。またそれぞれの群を大腸癌の治療におけるキードラッグであるoxaliplatinに暴露させchemosensitivity assayを行った。するとtarget siRNAの群では抗癌剤の感受性が優位に改善した。以上の結果は、癌（幹細胞）の抗癌剤耐性に今回我々が同定したCD107aが深く関連している可能性を示唆しているものと思われる。

This time, I will use the new standard のマーカー(CD107a) in clinical examination and use いたimmunostaining to adjust the current form. Normal colon epithelium can be compared and cancer cells can be easily identified by strong staining. Normal large intestinal epithelium also has the presence of CD107a-positive cells at the bottom of the vagina. Examples of moderately differentiated adenocarcinoma show weak staining on the basement membrane side of the cells. On the one hand, moderately differentiated adenocarcinoma means that the polarity of the glandular ducts is lost, and part of the undifferentiated component is contained, and part of the cancerous infiltration is advanced, and the cell membrane is strongly stained. Preoperative chemotherapy was performed and the symptoms were treated with strong intracellular staining. The same symptoms were treated before chemotherapy, and the results were the same as before and after chemotherapy. The above results show that the degree of differentiation of cancer is related to that of undifferentiated disease (cases of undifferentiated disease).発appears すること) and びchemotherapy とrelated すること (after chemotherapy は强発appears すること) が说 instigates された. This time, we decided to use CD107a high-sensitivity colorectal cancer cell line (CaCO2) and use siRNA to knockdown CD107a. After knockdown, the knockdown efficiency has been confirmed. Cell Propagation System Comparison of the siRNA group of the siRNA group and the suppression of the proliferation and the superiority of the siRNA group.またそれぞれの群をColorectal cancerのtreatmentにおけるキードラッグであるoxaliplatinにexposureさせchemosensitivity assayを行った. The sensitivity of target siRNA to anti-cancer drugs has been improved. The above results and the resistance of cancer (stem cells) to anti-cancer drugs are related to the possibility of CD107a being determined and the depth of the disease.