臨床応用を見据えた大腸癌幹細胞の新規分離法の確立と治療抵抗性機構の解明

建立结直肠癌干细胞新分离方法并阐明治疗耐药机制以期临床应用

• 批准号: 15K19883
• 负责人: 北原 知洋
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19883/
• 关键词: 癌幹細胞; CD107a; 抗癌剤耐性; 未分化

今回我々が同定した新規のマーカー(CD107a)に関して臨床検体を用いた免疫染色にてその発現形式を調べた。正常な大腸上皮と比較し、癌細胞では強い染色が認められた。正常な大腸上皮では特徴的に陰窩の底部にCD107a陽性細胞が存在した。中分化腺癌の症例では細胞内の基底膜側が弱く染色された。一方中分化腺癌でも腺管の極性を失い一部未分化な成分を含んだ部分や癌の浸潤の先進部では細胞膜が強く染色された。術前化学療法を行った症例では細胞内が強く染色された。また同一の症例で化学療法を行う前に生検を行った検体と化学療法後に採取した検体を染色して比較してみたが、同様の結果が得られた。以上の結果よりこのマーカーの発現は癌の分化度と関連すること（未分化な症例でより強く発現すること）及び化学療法と関連すること（化学療法後は強発現すること）が示唆された。次に今回同定したCD107aを高発現している大腸癌の細胞株(CaCO2)を用いてsiRNAによるCD107aのknockdownを行った。knockdown後にフローサイトメトリーにてknockdown効率を確認した。まず細胞増殖を検討するとCD107aをtargetとするsiRNAをトランスフェクションさせた群の方がコントロールsiRNA群と比較して、増殖が優位に抑制された。またそれぞれの群を大腸癌の治療におけるキードラッグであるoxaliplatinに暴露させchemosensitivity assayを行った。するとtarget siRNAの群では抗癌剤の感受性が優位に改善した。以上の結果は、癌（幹細胞）の抗癌剤耐性に今回我々が同定したCD107aが深く関連している可能性を示唆しているものと思われる。

我们在此发现的新标记（CD107A）的表达格式通过使用临床标本进行免疫染色来研究。与正常的结肠上皮相比，在癌细胞中观察到强染色。在正常的结肠上皮中，CD107a阳性细胞的特征存在于隐窝底部。在中间分化的腺癌的情况下，细胞的基底膜侧被微弱染色。另一方面，即使在中间分化的腺癌中，细胞膜也被强烈染色，这些区域包含一些未分化的成分和癌症侵袭的晚期区域。在术前化疗的情况下，对细胞进行了强染色。此外，在同一病例中进行化疗之前已经进行活检的样品并进行了比较后收集的样品，并获得了相似的结果。以上结果表明，该标记的表达与癌症的分化程度有关（在未分化的病例中更强烈表达），并且与化学疗法有关（在化学疗法后强烈表达）。接下来，使用siRNA击倒CD107a，使用结肠癌细胞系（CACO2）高度表达CD107A。敲低后，通过流式细胞仪证实了敲低的效率。首先，当检查细胞增殖时，用CD107a转染了siRNA作为靶标的siRNA在增殖中比对照siRNA组更为主要抑制。每组还暴露于Oxaliptin，这是一种用于治疗结肠癌的关键药物，并进行化学敏化测定。这导致目标siRNA组主要改善了抗癌剂的敏感性。以上结果表明，我们今天已经确定的CD107a可能与癌症（干细胞）中的抗癌耐药性密切相关。