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敗血症に伴う多臓器不全の新規治療～血管内皮細胞特異的ホーミングペプチドの開発～

脓毒症相关多器官衰竭的新疗法 - 血管内皮细胞特异性归巢肽的开发 -

基本信息

批准号：
15K20336
负责人：
中野志保
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

リポ多糖 (以下LPS) を20mg/kgの濃度で10週齢のオスのマウスに腹腔内注射し、敗血症を作製。10時間後の腎組織より血管内皮細胞を単離し、ファージライブラリを感染させた後、細胞を処理しファージを回収。回収したファージを次はLPS投与後10時間のマウスに尾静脈より注入を行い、10分後に屠殺し腎組織より血管内皮を単離、再度ファージを回収する。この操作をさらに1回繰り返し得られたファージを大腸菌に感染させ希釈系列を作りLB培地上で培養。得られたプラークを回収しPCRにて増幅させ配列を確認し3種類の候補ペプチド配列を得られた。この候補ペプチドを蛍光色素FAMでタグ付けしたものペプチドを作製し免疫染色による局在を調べることとした。ペプチドは非常に高価でありラットに使用する量が極めて多くなってしまうため、ペプチドの局在確認実験にはマウスを用いて行うこととした。LPSにより作製した敗血症マウスにLPS投与10時間後、尾静脈にタグ付きペプチドを注射し、10分後に屠殺し免疫染色によりペプチドの局在を調べた。これらペプチドは糸球体血管ではなく尿細管に局在していた。この原因として、もともとファージは腎より排泄されるため尿細管に停留する性質があり、単離するときに尿細管に停留していたファージを回収してしまったことが考えられた。そのため、次に肺組織、心組織を用いて血管内皮を単離する方法に切り替えペプチドの検索を行った。心臓の血管については3つの候補ペプチドを同定し、現在質量分析による受容体の同定を行っている。

LPS was injected intraperitoneally at a concentration of 20mg/kg for 10 weeks. After 10 hours, the kidney tissue was isolated from the vascular endothelial cells, and the cells were treated with the enzyme. After 10 minutes of LPS injection, the kidney tissue was killed, and the vascular endothelium was isolated. This operation was carried out in the presence of E. coli, which was cultured in LB medium. The PCR was selected to confirm the candidate list. The candidate for FAM was selected for immunostaining. The amount of time spent in the game is very high, and the game is confirmed. LPS was injected into the tail vein 10 minutes later and then killed 10 minutes later. The blood vessels of the globe are filled with urine and urine. The reason for this is that the urine tube stays open. In addition, the lung tissue and heart tissue were isolated from the blood vessel endothelium by means of a method of cutting off the blood vessel endothelium. The blood vessel of the heart is divided into three parts: the candidate is selected and determined, and the quality analysis is carried out.

项目成果

期刊论文数量（5）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Ulinastatin ameliorated acute kidney injury in sepsis via inhibition of endothelial injury

乌司他丁通过抑制内皮损伤改善脓毒症急性肾损伤

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Akihiro Uchida;Hideshi Okadaet al.
通讯作者：
Hideshi Okadaet al.

Low dosage aspirin attenuated multiple organ failure in sepsis through vascular endothelial protection

低剂量阿司匹林通过血管内皮保护减轻脓毒症中的多器官衰竭

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Takahiro Usui;Hideshi Okada et al.
通讯作者：
Hideshi Okada et al.

敗血症時におけるリコンビナントトロンボモジュリンの血管内皮保護効果の検討

重组血栓调节蛋白对脓毒症时血管内皮的保护作用研究

DOI：
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
北川雄一郎;岡田英志;鈴木浩大;小田和正;福田哲也;高田ちひろ;堀田康明;牛越博昭;豊田泉;竹村元三;小倉真治;鈴木浩大　岡田英志　小田和正　岡本遥　田中卓中野志保　吉田隆浩　豊田泉　小倉真治
通讯作者：
鈴木浩大　岡田英志　小田和正　岡本遥　田中卓中野志保　吉田隆浩　豊田泉　小倉真治

顆粒球コロニー刺激因子Knockoutマウスでは敗血症に伴う血管内皮障害が抑制される

粒细胞集落刺激因子敲除小鼠中与脓毒症相关的血管内皮损伤受到抑制