敗血症に伴う多臓器不全の新規治療～血管内皮細胞特異的ホーミングペプチドの開発～

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リポ多糖 (以下LPS) を20mg/kgの濃度で10週齢のオスのマウスに腹腔内注射し、敗血症を作製。10時間後の腎組織より血管内皮細胞を単離し、ファージライブラリを感染させた後、細胞を処理しファージを回収。回収したファージを次はLPS投与後10時間のマウスに尾静脈より注入を行い、10分後に屠殺し腎組織より血管内皮を単離、再度ファージを回収する。この操作をさらに1回繰り返し得られたファージを大腸菌に感染させ希釈系列を作りLB培地上で培養。得られたプラークを回収しPCRにて増幅させ配列を確認し3種類の候補ペプチド配列を得られた。この候補ペプチドを蛍光色素FAMでタグ付けしたものペプチドを作製し免疫染色による局在を調べることとした。ペプチドは非常に高価でありラットに使用する量が極めて多くなってしまうため、ペプチドの局在確認実験にはマウスを用いて行うこととした。LPSにより作製した敗血症マウスにLPS投与10時間後、尾静脈にタグ付きペプチドを注射し、10分後に屠殺し免疫染色によりペプチドの局在を調べた。これらペプチドは糸球体血管ではなく尿細管に局在していた。この原因として、もともとファージは腎より排泄されるため尿細管に停留する性質があり、単離するときに尿細管に停留していたファージを回収してしまったことが考えられた。そのため、次に肺組織、心組織を用いて血管内皮を単離する方法に切り替えペプチドの検索を行った。心臓の血管については3つの候補ペプチドを同定し、現在質量分析による受容体の同定を行っている。