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転写伸長促進機構を分子基盤とした生殖細胞の特性形成メカニズム

基于转录延伸促进机制的生殖细胞特征形成机制

基本信息

批准号：
16K18552
负责人：
高崎輝恒
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2017-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K18552/
关键词：
転写伸長 C. elegans 生殖細胞

项目摘要

生殖細胞は次世代を生み出すことができる特別な細胞である。多細胞生物はゲノム情報を巧みに発現調節することで多種多様な細胞を生み出すが、生殖細胞の特性を生み出す遺伝子発現制御のメカニズムについては依然として不明な点が多い。本研究は、生殖細胞の特性形成に係る遺伝子発現制御機構を明らかにするため、転写伸長促進機構に焦点をあて、その仕組みを分子レベルで解明することを目的として実施した。mRNA転写を担うRNAポリメラーゼIIは、プロモーター領域に集結したのち転写開始点のやや下流で一時的に転写反応を停止させる。その後、転写伸長促進機構の制御を受けて転写反応を再開させる。研究代表者は、線虫C. elegansを実験材料に用いてクロマチン免疫沈降実験を行うことにより、ヒストン修飾状態をゲノム全域に渡って解析した。そして転写開始点の下流域で、生殖細胞分化に係る遺伝子群を特徴付けるヒストンアセチル化修飾パターンを発見した。このヒストンアセチル化修飾パターンが目印となり、生殖細胞分化に係る遺伝子群の転写伸長を選択的に促進している可能性が考えられた。そこでこの過程をより詳細に解析するため、転写伸長促進機構の鍵酵素であるP-TEFbに免疫沈降用の標識を付加し、線虫内で発現させた。一般に、線虫の生殖細胞では外来遺伝子の発現が抑制される傾向にあるが、標識したP-TEFb遺伝子の単一コピーをMos転移酵素を利用して任意の遺伝子座に挿入することにより、正しく発現させることに成功した。またこのとき、標識したP-TEFbを生殖細胞特異的に発現させるため、体細胞で蛋白質分解の標的となるZF1タグを付加した。その結果、初期胚では期待通りの結果、すなわち体細胞では分解され、生殖細胞系列に特異的に残るという結果が得られた。しかしながら、後期胚になると生殖細胞系列でも分解されるという、予期しない結果に至ることが判明した。

Germ cells are the next generation. Multicellular organisms have a variety of information and processes that regulate the production of multiple cells, and the characteristics of germ cells that regulate the production of multiple cells remain unknown. The aim of this study is to clarify the mechanism of gene development and control in the formation of germ cell characteristics, and to clarify the mechanism of elongation promotion. mRNA transcription is the most important part of RNA transcription. It is the most important part of mRNA transcription. The control of the post-production and post-production promotion mechanism is subject to the reopening of the post-production and post-production mechanism. Study representative: C. elegans is used for the analysis of the whole domain. In addition, the characteristics of germ cell differentiation, genetic subgroup, and genetic modification are also discussed. The possibility of promoting the growth of germ cell differentiation by selecting the gene subgroup is examined. This process is analyzed in detail, and the key enzyme of elongation promotion mechanism is P-TEFb, and the identification for immune sedimentation is added. In general, germ cells of nematodes have a tendency to inhibit the development of foreign genes, such as P-TEFb gene expression, Mos transfer enzyme, and the use of arbitrary gene loci to successfully detect foreign genes. P-TEFb is a germ cell-specific protein marker and a target for somatic protein breakdown. The results of the early embryo are expected to pass through the results of the somatic decomposition, and the results of the reproductive cell series are specific. The germ cell series of the late embryo is divided into two parts, and the result is determined.