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橋小脳低形成10型の分子病態メカニズムの解明

桥小脑发育不全10型分子病理机制的阐明

基本信息

批准号：
17K15623
负责人：
波田一誠
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Oita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-01 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

橋小脳低形成（PCH）の10型は、RNA キナーゼ CLP1 遺伝子変異によって断片化した tRNA (tRF) が核内に蓄積すること、p53 の活性化によって神経特異的に細胞死が生じることが知られている。しかしながら、この病因が tRF の蓄積によるものなのか、またCLP1 遺伝子変異がどのような経路を介して p53 を活性化しているのか、その詳細は未だ明らかにされていない。そこで本研究では、この疾患に対する治療法開発の一助となることを期待し、ヒト神経芽細胞株、ゼブラフィッシュそしてマウスをモデルに、CLP1 遺伝子変異による神経変性疾患の詳細な分子メカニズムを解明することを目的とする。平成29年度は、ヒト神経芽細胞株とゼブラフィッシュを用いた解析によって、ある tRF （xtRF）がp53 を介して神経変性を引き起こすことを見出した。そして、平成30年度は、xtRF が糖代謝経路で機能している酵素を介してp53 を活性化していることを明らかにした（Inoue et al. BBRC, 2020）。本年度では、ヒト PCH10 型の病的変異を導入したマウスの作製を試みた。申請者は PCH10 型のモデルマウスを作製するために、CRISPR/Cas9システムを利用した。具体的には、病的変異を導入した一本鎖DNAを相同組み換えのドナーとして使用し、エレクトロポレーションによって、Cas9タンパク質と変異部分をターゲットにした gRNA ともにマウスの受精卵に導入した。その結果、CLP1 の 140 番目のアルギニンが終止コドンに置き換わったマウスの作製に成功した。これは、PCH10 型の初めての哺乳動物モデルであり、これを用いたPCH10 型の病態メカニズムの全容解明及び治療法の確立が大いに期待される。

Small low formation (PCH), type 10, RNA, CLP1, subtype, fragment, tRNA (tRF), p53, activation, cell death, cell death. The cause of the disease, the tRF, the cause of the disease, the cause of the disease. The purpose of this study is to help the prevention and treatment of sexual diseases. The purpose of this study is to help the prevention and treatment of sexual diseases. The purpose of this study is to help the prevention and treatment of sexual diseases, such as cell lines, and CLP1 cells. In the year of Pingcheng 29, the cell line of Pingcheng 29 was used to analyze the cell line, analyze the virus, tRF (xtRF), p53, and introduce the divine nature. In recent years, Pingcheng 30, xtRF Glycosyltransferase (Glycosyltransferase) can be used to introduce p53 activating enzymes, which can be used to detect protein expression (Inoue et al. BBRC, 2020). In the current year, people with severe acute respiratory syndrome (PCH10) and severe acute respiratory syndrome (PCH10) have been enrolled in this year's hospital. Applicants are required to use PCH10 and CRISPR/ Cas9 to make full use of the information. The details of the disease and the disease were recorded in a copy of the DNA. The same tissue was used. The zygote was used, and the Cas9 was used. The fertilized egg was found to be in the zygote. Some of the patients were infected with gRNA. According to the results of the test, the results showed that CLP1 140 programs were successful. The breast-feeding animals of type PCH10 and type B were treated with the method of comprehensive explanation and treatment of breast-feeding animals. The symptoms of breast-feeding animals were diagnosed and treated with "PCH10-type".