角層バリア形成の分子基盤の解析

角质层屏障形成的分子基础分析

• 批准号: 17K16359
• 负责人: 葛野 菜々子
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K16359/
• 关键词: syntaxin-4; 角化; ノックアウト; バリア

1. 表皮「上層」で特異的にSyntaxin-4をノックアウトしたSyntaxin-4コンディショナルノックアウトマウスを作製し、Syntaxin-4のCE形成における役割を解析する。そのために、前年度に表皮上層プロモーター (SASPase、Involucrin 、Keratin-1) 下でCreを発現するヘアレスマウスの作製に着手した。今年度は各Creマウスを、Cre/loxPによる組換えによりtdTomatoを発現するマウスと交配することでCreによる組換えが皮膚表皮のどの層から起こるのかを明らかにした。また、前年度に作成を開始したSyntaxin-4 floxマウスはキメラマウスのセレクション・CAG-Flpマウスと交配を終え、表皮上層特異的にCreを発現する各マウスとSyntaxin-4 floxマウスを交配中である。2. 生体マウス表皮に外来遺伝子をまだらに導入する方法の確立に成功した。そこでSyntaxin-4とEGFPの融合タンパク質を発現するプラスミドを生体マウス表皮に導入し、Syntaxin-4を強制発現した影響を顕微鏡下で観察した結果、Syntaxin-4が角化に影響を与える可能性が示唆された。3. CE形成過程におけるSyntaxin-4の影響を解析するためにCRISPR/Cas9システムを用いSASPaseプロモーター下流にSyntaxin-4とEGFPの配列を挿入したマウスを作成した。Syntaxin4とEGFPの融合タンパク質を発現するマウスが1匹生まれたが、そのマウスは正常ではなく全身が硬い膜のような組織に覆われていた。このマウスの皮膚切片を作成し観察した結果、Syntaxin-4とEGFPの融合タンパク質は表皮上層で発現しており、このマウスの角質層は正常なマウスに比べて厚かった。

1. On the epidermis, there is a special Syntaxin-4 on the skin, which is called "Syntaxin-4". In this case, the CE of the epidermis is formed, and the CE of the epidermis is formed to analyze the problem of service cutting. In the previous year, under the Cre (SASPase, Involucrin, Keratin-1), the epidermis is covered. You can see that the skin is broken. This year, all Cre, Cre/loxP, tdTomato, mating, Cre, epidermis, epidermis. At the beginning of the previous year, we started to learn that there was no Syntaxin-4 flox infection in the first half of the year, and that in the previous year, we began to learn that there was a problem in mating in the previous year, and that the special Cre in the epidermis showed that there was a difference in mating in the first half of the year, and the special Cre on the epidermis showed that the mice were in the process of mating. two。 In vivo, the epidermis, the foreign body, the skin, the epidermis, the epiderm The results of Syntaxin-4 EGFP fusion, Syntaxin-4 keratinization and the possibility of epidermis penetration, Syntaxin-4 keratinization, and microcosmicity are also discussed. 3. The process of CE formation is related to the Syntaxin-4 effect. This is achieved by using the configuration of the lower-level "Syntaxin-4" EGFP in the configuration column "Syntaxin-4" in the context of the SASPase operation. The Syntaxin4