Analysis of Atg5-independent autophagy pathway in human intestinal tract and development of new therapeutic strategy for Crohn's disease

人肠道Atg5非依赖性自噬通路分析及克罗恩病治疗新策略的开发

• 批准号: 17K16544
• 负责人: 安枝 明日香
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K16544/
• 关键词: IBD; オートファジー; クローン病; 炎症性腸疾患; LC3; Atg5/7 independent

近年の研究よりクローン病とオートファジーの関連性が明らかになった。われわれは腸管上皮で起こるオートファジー、とりわけAtg5非依存的オートファジーの変調に着目し本研究を実施した。クローン病患者由来腸管上皮サンプル5例、大腸癌患者由来正常組織サンプル10例を用い、ウエスタンブロット法にて検討を行った。クローン病では通常型オートファジー関連たんぱくLC3の低発現、オートファジーの選択的分解基質であるp62の高発現、ならびにAtg5非依存的オートファジー低減を想定し検討を行った。予想に反しLC3は症例間の個体差が大きく、p62関しても同様の結果であった。Atg5については、両サンプルおいて同様の発現が見られ、Atg5非依存的オートファジーに関わる差を見出すことはできなかった。続いて、クローン病組織30例、正常組織10例を固定後、パラフィン切片を作成、薄切、LC3、Atg5、p62抗体を用いて免疫染色し、発現を観察した。クローン病サンプルにおいてp62の発現が高い傾向を見出したものの、正常組織との間に差を見出すことはできなかった。また、LC3およびAtg5においてもサンプル間で明らかな差を観察しなかった。よって、患者組織を用いた検討では個体差を完全に除くことは困難なため、腸管上皮由来細胞株Caco2を用い、誘導が示唆される化合物ならびにオートファジー阻害剤BafilomycinA1添加によるオートファジーの動態を観察した。通常型およびAtg5非依存的オートファジーを検出するため、ファゴソーム膜を特異的に蛍光染色し共焦点顕微鏡にて観察した。化合物添加によるオートファジー誘導並びに阻害剤による阻害が観察された。以上のことから、ヒト組織サンプルにおけるオートファジーの観察について、個体差などの交絡因子を抑える検討方法について今後模索し再検討することとする。

In recent years, research on the relationship between disease and disease has been carried out. This study was carried out on the basis of the results of the study. 5 cases of colorectal cancer were from intestinal epithelium, 10 cases from normal tissue. Low occurrence of LC3, high occurrence of LC3, high occurrence of LC3, low occurrence of LC3, high occurrence of LC3, low occurrence of LC3, high occurrence of LC3, low occurrence of LC3, high occurrence of LC3, low occurrence of LC3, low occurrence of LC3, high occurrence of LC3, low occurrence of LC3, high occurrence of LC3, low occurrence of LC The individual differences between LC3 and LC 3 are expected to be large, and the results of p62 are similar. Atg5 is a non-dependent entity. It is a non-dependent entity. 30 cases of diseased tissues and 10 cases of normal tissues were fixed, and then the sections were prepared, thin-cut, and immunostained with LC3, Atg5, and p62 antibodies. The occurrence of p62 in the diseased tissue tends to be high, and the occurrence of p62 in the normal tissue tends to be low. Also, there is a clear difference between the LC3 and Atg5 servers. In addition, the dynamics of Bafilomycin A1 addition were observed in the study of cell lines derived from intestinal epithelium Caco2. Common type and Atg5 independent color detection, color detection, confocal microscopy The compound added to the reaction mixture caused the reaction to occur. The above methods for detecting the correlation factors of individual differences and future models are discussed.