炎症性腸疾患症例より構築した細胞におけるオートファジー動態個別化解析

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先行研究にて同定したオートファジー誘導物質の腸炎緩和能について、マウスからヒトに発展させ、同様のメカニズム（対象とするサンプルが、腸管のマクロファージにおいて、オートファジーを亢進させることにより、炎症性サイトカインの減少、非炎症性サイトカインの上昇を介した腸炎緩和を誘導した）でヒト由来サンプルでも確認できるかということを目的に検討を実施した。①オルガノイドの樹立・サンプル添加実験：本年度は、大腸癌正常部よりオルガノイドを構築し、安定的に培養できる条件を確立した。その上で、試験サンプルを添加し、オートファジーについてサンプル添加によるわずかな誘導が確認できた。②対象症例腸管粘膜固有層由来マクロファージにおける有効性の検討：炎症性腸疾患の手術時サンプルを採取し、FACSにて腸管マクロファージをソート、培養し、サンプル添加によるオートファジー誘導の差異を検討している。実験十分量の細胞生存率を得ることが困難であることから、来年度も引き続き方法の確立を目指す。③試験サンプル有効成分の同定：試験サンプル中の有効成分を同定すべく、複数分画（エーテル層、ブタノール層、酢酸エチル層、水層等）にて分画物を分取し、マウス由来マクロファージを刺激した条件で試験サンプルを添加、炎症状態について検討した。複数の分画層において、炎症マーカーの抑制が確認されたものを細分化し、現在残り数個まで同定を行った。今後、炎症緩和に有効性を示している物質を同定し、再度マウスへの投与実験、オルガノイドへの投与実験を予定している。