ウイルスベクターによる遅い軸索輸送解析

使用病毒载体进行慢速轴突运输分析

• 批准号: 08770004
• 负责人: 寺田 純雄
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08770004/
• 关键词: 軸索輸送; ウイルスベクター; ニューロフィラメント

エピトープタッギングを行ったニューロフィラメントM遺伝子をアデノウイルスベクターに組み込み,これをニューロフィラメントH+lacZの融合遺伝子が導入された、軸索中に中間径フィラメントを欠くトランスジェニックマウス(B6C3F2/44A)のL4の後根神経節へ注入し、その遺伝子産物の坐骨神経内での動態を形態学的に解析することを目的として、実験を開始した。共焦点走査型レーザー顕微鏡及び透過型電子顕微鏡による免疫組織化学法から、タグ付きニューロフィラメントM蛋白質は、確かに中間径フィラメントを形成することなく遅い軸索輸送の速さで座骨神経軸索内を輸送されること、及びラベルの先端部の位置は各軸索間でよく同期しており、かつラベルの軸索方向の強度分布はその先端部で極めて急峻な立ち上がりを呈することが観察できた。更に対照実験として中間径フィラメントを軸索内に有する正常の後根神経節細胞に遺伝子導入した場合、とくに細胞体から離れたラベルの先端部に近い部分でラベルが有意に微少管と共存することが判明した。以上の結果から少なくともニューロフィラメントM蛋白質の輸送に関しては、in vivoの単一軸索レベルでの高解像度下の観察によって(1)細胞骨格蛋白質の軸索輸送の為には細胞体内での重合が必要条件とはならず、単量体あるいはオリゴマーの形で運ばれ得る点でポリマースライディング仮説は成り立たないこと、(2)遅い軸索輸送にも微少管依存性モーター分子が関与する可能性の高いこと、及び(3)メタボリックラベリング法による結果を裏付ける形で、受動的拡散現象からは区別される、おそらくは各軸索間で共通したメカニズムによって能動的な輸送が行われていることが明らかとなった。

将表位标记的神经丝M基因掺入腺病毒载体中，并将​​其注射到缺乏转基因小鼠（B6C3F2/44A）的L4的背根神经节中，缺乏轴突中的中间丝，该轴突中的轴突中的神经纤维H+LACZ融合基因所引入了实验。坐骨神经内基因产物的动力学。使用共凝扫描激光显微镜和传输电子显微镜的免疫组织化学方法表明，标记的神经丝M蛋白肯定会以缓慢的轴突传输速度运输在坐骨神经轴突中，而无需形成中间的纤维，而无需表现出每种轴突的稳定性，并且在轴突之间进行了很好的同步，并且在轴突之间进行了很好的启动。此外，作为对照实验，当将基因引入轴突内的中间丝中的正常背根神经节细胞中时，发现标签与微管显着共存，尤其是在标签尖端附近的区域，远离细胞体。从上述结果中，至少关于神经丝M蛋白的运输，在体内高分辨率下在单轴突水平上进行高分辨率的观察结果表明，（1）细胞体内的聚合不是细胞骨架蛋白的轴突运输的必要条件微管依赖性运动分子也将参与缓慢的轴突运输，（3）通过轴突之间的一种机制积极地进行转运，轴突与被动扩散现象区别开来，支持代谢标记的结果。