Generation of African Swine Fever virus-resistant pigs by applying the concept of gene editing technology

应用基因编辑技术概念培育非洲猪瘟病毒抗性猪

• 批准号: 21KK0124
• 负责人: 谷原 史倫
• 金额: $ 12.15万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-10-07 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21KK0124/
• 关键词: アフリカ豚熱; ゲノム編集; CRISPR/Cas9; ブタ

アフリカ豚熱（African Swine Fever: ASF）は家畜豚への驚異的な伝搬力と致死率から世界の養豚業を破壊しうる伝染病であり、現在までワクチンを含む治療法はない。本研究では、ブタの体内に発現させた遺伝子切断酵素Cas9とCas9を標的ゲノム配列に誘導するガイドRNA(gRNA) により侵入してきたウイルスDNAを切断・失活させるという発想のもと、ASFウイルスを標的としたCas9/gRNA発現ブタを作出する。細胞内に発現させたゲノム編集システムにより感染時に侵入してきたASFウイルスDNAを切断し、ASFウイルスの増殖を阻害することで感染防御能を付与する。現在もASFが散発し多数の野生株を保存しているベトナムで２機関と共同研究を行い、ASFウイルス感染抵抗性ブタ系統の作出を試みる。細胞レベルでの感染実験をベトナムで実施するため、日本国内で初代ブタマクロファージにSV40LT遺伝子とpTERT遺伝子を組み込んだ不死化ブタマクロファージの作製に着手した。ウイルスベクターを用いてSV40LT遺伝子とpTERT遺伝子を導入する準備は完了し、現在は腎臓および血液から初代ブタマクロファージの単離を行っている。加えて、昨年度はCOVID-19の感染拡大の影響でベトナムに赴くことはできていなかったが、本年度は共同研究実施先のVietnam National University of Agricultureへ実際に赴き、共同研究者との打ち合わせを行い、研究実施にむけた環境整備と実験系のセットアップを行った。

African Swine Fever (ASF) is an amazing disease that affects livestock and pigs worldwide. In this study, Cas9 and Cas9 target genes were detected in vivo, and Cas9/gRNA target genes were detected in vivo. Cell development requires the ability to protect against infection by cutting off ASF DNA and inhibiting ASF growth. Now, most wild ASF strains are preserved, and the two organs are working together to develop an infection resistance system for ASF. The first generation of virus infection in Japan started with SV40 LT virus and pTERT virus. The SV40 LT gene is ready for introduction, and now it is ready for introduction. In addition, the impact of COVID-19 infection was greatly affected last year. This year, the Vietnam National University of Agriculture conducted joint research on the implementation of the project. The joint research on the implementation of the project was carried out by the co-investigators. The environmental protection and implementation of the project were carried out.