Analysis of Age-dependent Functional Changes in Skeletal Muscle CB1 Receptors by an in Vitro Model of Aging-related Muscle Atrophy

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①生体適合材料ポリジメチルシロキサン（PDMS）を用いた伸展培養系をもとに骨格筋老化を評価可能なin vitroモデルの構築および、②CRISPR/Cas9システムを用いたカンナビノイドCB1受容体のノックアウト技術の確立を行った。また、in vivoでの骨格筋CB1受容体の機能を研究するためのノウハウを学ぶために、フランスボルドーに渡航し、「Team Endocannabinoids and Neuroadaptation (PI: Giovanni Marsicano)」にて研究滞在をした。①2021年度に確立したPDMSを用いた伸展培養系におけるPDMSの表面設計に関する論文を投稿し、レビューワーのコメントに従い追加実験を行った。追加実験では、伸展培養中におけるPDMS表面からのコラーゲン分子の溶出の評価と、Live Dead Assayを用いた伸展培養後の細胞接着の評価を行った。その結果、設計した表面では従来の方法に比べて、培養中でのコラーゲンの溶出が抑制され、また、伸展培養における細胞接着も向上する結果が得られた。それら結果を踏まえてリバイズした原稿を再投稿したがリジェクトとなってしまったため、現在他の論文誌への投稿を準備中である。上記の結果については、国際学会「32nd Annual Conference of the European Society for Biomaterials」にてポスター発表を行った。②ヒトカンナビノイド受容体をコードするCnr1遺伝子に変異を加えうるsgRNAを同定し、そのsgRNAを用いて神経芽細胞腫SH-SY5YのCnr1遺伝子に変異を加えることに成功した。現在は、その細胞のCB1受容体の欠失および機能障害を評価している。