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Analysis of Age-dependent Functional Changes in Skeletal Muscle CB1 Receptors by an in Vitro Model of Aging-related Muscle Atrophy

通过衰老相关性肌肉萎缩的体外模型分析骨骼肌 CB1 受体的年龄依赖性功能变化

基本信息

批准号：
22KJ2960
负责人：
森一明
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2960/
关键词：
PDMS CRISPR/Cas9 表面設計カンナビノイドCB1受容体

项目摘要

①生体適合材料ポリジメチルシロキサン（PDMS）を用いた伸展培養系をもとに骨格筋老化を評価可能なin vitroモデルの構築および、②CRISPR/Cas9システムを用いたカンナビノイドCB1受容体のノックアウト技術の確立を行った。また、in vivoでの骨格筋CB1受容体の機能を研究するためのノウハウを学ぶために、フランスボルドーに渡航し、「Team Endocannabinoids and Neuroadaptation (PI: Giovanni Marsicano)」にて研究滞在をした。①2021年度に確立したPDMSを用いた伸展培養系におけるPDMSの表面設計に関する論文を投稿し、レビューワーのコメントに従い追加実験を行った。追加実験では、伸展培養中におけるPDMS表面からのコラーゲン分子の溶出の評価と、Live Dead Assayを用いた伸展培養後の細胞接着の評価を行った。その結果、設計した表面では従来の方法に比べて、培養中でのコラーゲンの溶出が抑制され、また、伸展培養における細胞接着も向上する結果が得られた。それら結果を踏まえてリバイズした原稿を再投稿したがリジェクトとなってしまったため、現在他の論文誌への投稿を準備中である。上記の結果については、国際学会「32nd Annual Conference of the European Society for Biomaterials」にてポスター発表を行った。②ヒトカンナビノイド受容体をコードするCnr1遺伝子に変異を加えうるsgRNAを同定し、そのsgRNAを用いて神経芽細胞腫SH-SY5YのCnr1遺伝子に変異を加えることに成功した。現在は、その細胞のCB1受容体の欠失および機能障害を評価している。

①生物体复合材料聚二甲基硅氧烷（PDMS）利用胶原蛋白生长发育成骨细胞系，诱导骨细胞成熟化，可能在体外诱导骨细胞凋亡，②CRISPR/Cas9重组蛋白利用胶原酶诱导骨细胞凋亡，CB1受容体细胞凋亡，利用胶原蛋白技术诱导骨细胞凋亡，建立了一种新的体外实验模型。在体内内源性大麻素和神经适应性研究中，体内内源性大麻素CB1受容体神经适应能力研究是一项非常重要的研究。①2021年度设立的PDMS追溯使用权展列体系将继续使用PDMS表面处理技术，并对PDMS表面处理技术进行补充。加入阻碍物，继续发展中的细胞溶解，PDMS表面溶解的蛋白质分子脱出细胞，Live Dead Assay采用琼脂扩散法，将细胞溶解在培养基中进行检测。その結果、設計した表面では従来の方法に比べて、培養中でのコラーゲンの溶出が抑制され、また、伸展培養における細胞接着も向上する結果が得られた。それら結果を踏まえてリバイズした原稿を再投稿したがリジェクトとなってしまったため、現在他の論文誌への投稿を準備中である。上一篇：国际生物材料学会“第32届欧洲生物材料学会年会”学术报告②黄芪皂苷Cnr1受体拮抗剂加替诺明sgRNA诱导同定殖，黄芪sgRNA诱导同定殖，黄芪sgRNA诱导同定殖，黄芪sgRNA诱导同定殖，黄芪sgRNA诱导同定殖。然而，在这种情况下，嗜酸性细胞CB1受容体失活的影响，能迅速损害嗜酸性细胞正常增殖。