新規アッセイ系による小胞体膜上糖鎖のフリップフロップ現象の分子機構解明

使用新的检测系统阐明内质网膜上糖链翻转现象的分子机制

基本信息

  • 批准号:
    22KJ3010
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.33万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2023
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2023-03-08 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

真核生物アスパラギン結合型糖鎖の生合成過程において、小胞体膜に挿入されたドリコールピロリン酸結合型糖鎖(Dolihol pyrophosphate Linked Oligosaccharide; DLO)は細胞質側から内腔側へフリップフロップすることが知られている。本研究はフリップフロップの分子機構を解明すべく、膜上のDLOの挙動を追跡する小胞体膜反応場の構築を目指した。その構築手法として、リポソームのリン脂質を、酵素反応によりDLOに変換することを計画した。具体的には、(1)標識化したUDP-GlcNAc誘導体を供与体として、N-acetylglucosamine-phosphotransferase(DPAGT1)の作用でGlcNAcモノリン酸をリン脂質に対して導入し、(2)導入されたGlcNAc残基を受容体とし、endo-β-N-acetylglucosaminidase(ENGase)を用いてオキサゾリン化糖鎖を導入することとした。今年度はこれら2種類の反応系に必要な基質プローブの化学合成を行い、非リポソーム環境にて酵素反応を実施した。(1)の実験では、ドリコールモノリン酸類縁体であるシトロネロールリン酸に対し、クリックケミストリーによる標識が可能なアルキニル基を導入したUDP-N-アセチルグルコサミンプローブ(UDP-GlcNAlk)を基質として組換えDPAGT1を作用させた。その結果、DPAGT1がこの基質に対して活性を示し、非天然型構造を許容することを明らかにした。
The process of eukaryotic アスパラギ <e:1> Linked Oligosaccharide symbiosynthesis にお て て, small cell membrane に insert されたドリコ <s:1> ピロリ ピロリ ピロリ <s:1> acid linked oligosaccharide (Dolihol pyrophosphate Linked Oligosaccharide;) DLO) cytoplasmic side ら ら lumen side へフリップフロップする とが know られて る る る. This study は フ リ ッ プ フ ロ ッ プ の molecular institutions を interpret す べ く, membrane の DLO の 挙 dynamic を tracing す る small cell membrane against 応 field の build を refers し た. そ の construct technique と し て, リ ポ ソ ー ム の リ ン lipid を, enzyme reverse 応 に よ り DLO に variations in す る こ と を project し た. Specific に は, (1) identify し た UDP - induced body を GlcNAc body and supply と し て, N - acetylglucosamine - phosphotransferase (DPAGT1) の role で GlcNAc モ ノ リ ン acid を リ ン lipid に し seaborne て import し, (2) import さ れ た Glc NAc residues を by let body と し, endo - beta - N - acetylglucosaminidase (ENGase) を い て オ キ サ ゾ リ ン melt sugar lock を import す る こ と と し た. Our は "こ れ ら 2 kinds の 応 department に necessary な matrix プ ロ ー ブ の chemical synthesis を い, non リ ポ ソ ー ム environment に て enzyme reverse 応 を be applied し た. (1) の be 験 で は, ド リ コ ー ル モ ノ リ ン acids try body で あ る シ ト ロ ネ ロ ー ル リ ン acid に し, seaborne ク リ ッ ク ケ ミ ス ト リ ー に よ る logo が may な ア ル キ ニ ル base を import し た UDP - N - ア セ チ ル グ ル コ サ ミ ン プ ロ ー ブ (UDP - GlcNAlk) を matrix と し て group in え DPAGT1 を role Youdaoplaceholder0. そ の results, DPAGT1 が こ の matrix に し seaborne て active を し, unnatural type structure を allowable す る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

期刊论文数量(7)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
ドリコールピロリン酸結合型糖鎖アナログの化学酵素的合成研究
多乙醇焦磷酸连接的碳水化合物类似物的化学酶法合成研究
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;菊間 隆志;高橋 諭;石井 希実;松尾 一郎;梶浦 裕之;武田 陽一
  • 通讯作者:
    武田 陽一
ドリコールピロリン酸結合型糖鎖の構築を目指したENGase糖転移反応の検討
研究旨在构建多羟基焦磷酸连接糖链的 ENGase 转糖基反应
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;菊間 隆志;高橋 諭;石井 希実;松尾 一郎;梶浦 裕之;武田 陽一
  • 通讯作者:
    武田 陽一
ドリコールピロリン酸結合型糖鎖の膜反応場構築に向けた DPAGT1 基質の合成と活性評価
用于构建多乙醇焦磷酸连接糖链膜反应场的 DPAGT1 底物的合成和活性评价
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;菊間 隆志;高橋 諭;石井 希実;松尾 一郎;武田 陽一
  • 通讯作者:
    武田 陽一
フリップフロップ反応場の構築を目指したDPAGT1基質の合成
合成DPAGT1底物旨在构建触发器反应场
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野加苗;菊間隆志;高橋諭;石井希実;松尾一郎;武田陽一
  • 通讯作者:
    武田陽一
脂質膜上糖鎖の評価系開発に向けたGlcNAc-pyrophosphate-dolicholアナログの化学酵素合成
GlcNAc-焦磷酸-dolichol类似物的化学酶法合成用于开发脂膜上聚糖的评估系统
  • DOI:
  • 发表时间:
    2023
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;菊間 隆志;高橋 諭;石井 希実;松尾 一郎;梶浦 裕之;武田 陽一
  • 通讯作者:
    武田 陽一
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佐野 加苗其他文献

スルホニルイミダゾリウム塩を用いたリポヌクレオチドの合成
使用磺酰咪唑鎓盐合成脂核苷酸
  • DOI:
  • 发表时间:
    2023
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    北浦 祐樹;佐野 加苗;上嶋 里菜;菊間 隆志;武田 陽一
  • 通讯作者:
    武田 陽一
Preparation and Electrical Properties of La-Sr-F-S compounds for Fluoride Ion Conductor
氟离子导体La-Sr-F-S化合物的制备及电性能
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;菊間 隆志;高橋 諭;石井 希実;松尾 一郎;梶浦 裕之;武田 陽一;Shintaro Tachibana and Yuki Orikasa
  • 通讯作者:
    Shintaro Tachibana and Yuki Orikasa
コアフコシルN-グリカンに作用するENGaseの活性検出プローブの合成
作用于核心岩藻糖基N-聚糖的ENGase活性检测探针的合成
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    永田 光穂;石井 希実;佐野 加苗;飯野 健太;松崎 裕二;西川宜秀;加藤 紀彦;山本 憲二;松尾 一郎
  • 通讯作者:
    松尾 一郎
アスパラギン結合型糖鎖の生合成過程解明を目指した7糖の合成
七糖的合成旨在阐明天冬酰胺连接的糖链的生物合成过程
  • DOI:
  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;宇津井 隆志;小杉 実沙;石井 希実;松尾 一郎
  • 通讯作者:
    松尾 一郎
糖タンパク質糖鎖の効率的合成とその応用展開
糖蛋白糖链的高效合成及其应用开发
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    佐野 加苗;永田 光穂;松尾 一郎
  • 通讯作者:
    松尾 一郎

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  • DOI:
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  • 发表时间:
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  • 期刊:
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
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合成基質による膜局在性糖転移酵素Algの活性検出系の開発と基質認識機構の定量的解明
开发使用合成底物检测膜定位糖基转移酶 Alg 活性的系统并定量阐明底物识别机制
  • 批准号:
    23K13856
  • 财政年份:
    2023
  • 资助金额:
    $ 2.33万
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
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