Elucidation of spread and circulation of antimicrobial resistance factors driven by the release of untreated wastewater to the environment in Vietnam

阐明越南未经处理的废水排放到环境中导致的抗菌素耐药性因素的传播和循环

• 批准号: 22KK0058
• 负责人: 春日 郁朗
• 金额: $ 12.81万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-10-07 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KK0058/
• 关键词: 薬剤耐性遺伝子; ベトナム; 下水; 薬剤耐性因子; 未処理下水

2023年2月に渡航し、ベトナム側共同研究者と研究打合せ並びに採材を実施することができた。日本の下水と比較して、ベトナムの下水の中には懸濁物質の濃度が非常に高いものがあり、ろ過の効率化を図ることが課題として明らかになった。ハノイ、ダナン、ホーチミンの都市下水を採水し、基礎水質、大腸菌、セフォタキシム耐性大腸菌の計数を行った。粗ろ過した試料から細菌画分を回収し、DNA抽出を実施した。更に、下水試料に臨床上重要な４種類の抗菌薬（セフォタキシム、メロペネム、コリスチン、チゲサイクリン）を添加して培地中で増菌培養を行い、重要な薬剤耐性細菌の集積を試みた。多くの試料において、一晩の培養で増菌が認められ、下水中にはこれらの抗菌薬に耐性を有する細菌が含まれていることが示された。また、同じ試料をガラス繊維ろ紙でろ過した後、固相抽出に供して、抗菌薬スクリーニングのための試料調製も現地で行った。固相抽出には、既報に準じてOasis HLBとAC2をタンデムに接続したものを用いた。ベトナムの調査とは別に、わが国の都市下水も採取し、ベトナムの下水データと比較することを試みた。日本の下水試料を用いて、ハイブリッドキャプチャーによる対象遺伝子の濃縮を行い、次世代シーケンサーで薬剤耐性遺伝子の組成解析を試みた。その結果、およそ200種類程度の薬剤耐性遺伝子が検出された。流入水では、アミノグリコシド耐性遺伝子やマクロライド耐性遺伝子の存在割合が多いことが明らかになった。

他于2023年2月旅行，能够与越南合作者举行研究会议并收集材料。与日本的污水相比，越南污水的悬浮物浓度很高，并且已经澄清了挑战以提高过滤效率。收集了河内，达南和胡志明市的城市污水，并计算了基础水质，大肠杆菌和耐头孢昔米的大肠杆菌。从粗滤样品中收集细菌级分，并进行DNA提取。此外，将四种临床上重要的抗生素（头孢菌素，梅罗皮烯，结肠素和替甘克林）添加到污水样品中，并在培养基中进行了细菌培养，并尝试了尝试的重要药物抗药性细菌。许多样品在隔夜培养物中显示细菌生长，表明污水含有对这些抗生素耐药性的细菌。通过玻璃纤维滤纸过滤相同的样品，然后进行固相萃取，并在现场进行抗生素筛选样品。对于固相提取，如先前报道的那样，将绿洲HLB和AC2连接到串联。除了越南调查外，我们还试图在日本收集城市污水，并将其与越南污水数据进行比较。使用日本污水样品，我们通过杂化捕获量丰富了靶基因，并试图使用下一代序列分析耐药性基因的组成。结果，检测到大约200种耐药性基因。已经揭示了氨基糖苷耐药基因和大环内酯类耐药基因的存在在涌入水中很高。

项目成果

ベトナムにおける薬剤耐性菌のワンヘルスアプローチによるサーベイランス

使用“One Health”方法监测越南的耐药细菌

• 发表时间: 2023
• 作者: 春日郁朗

水環境における薬剤耐性問題

水生环境中的耐药性问题

• 发表时间: 2023
• 作者: 春日郁朗;春日郁朗
• 通讯作者: 春日郁朗