鳥類のミュラー管抑制物質およびその受容体の遺伝子のクローニングと構造解析

禽苗勒氏管抑制剂及其受体基因的克隆与结构分析

• 批准号: 08740634
• 负责人: 小林 哲也
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Saitama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08740634/
• 关键词: 鳥類; ミュラー管抑制物質; ミュラー管抑制物質受容体; クローニング

哺乳類と鳥類の雄胚で観察されるミュラー管の退縮は、精巣のセルトリ細胞より分泌されるミュラー管抑制物質(MIS)により誘導される。本研究では、鳥類MISの生理作用及びその作用機構などに関する分子レベルでの研究を進めるための基礎として、MIS及びその受容体の遺伝子のクローニングと構造解析に関する研究を試みた。ミュラー管の退縮が観察されるウズラ6,7,8日胚の生殖腺からRNAを抽出した後、cDNAを調整した。プライマーはニワトリMIS遺伝子を参考に合成を行った。これらを用いてRT-PCRを行った結果、約460bpの断片が得られた。この断片の塩基配列の分析を行った結果、ニワトリ及びマウスMISと塩基レベルでそれぞれ92.8%、53.9%、アミノ酸レベルで88.9%、32.3%の相同性が観察された。またこれは胚のミュラー管退縮時の生殖腺ばかりでなく、5週齢の成体の精巣さらに卵巣においても観察され、鳥類のMISはミュラー管の退縮に関与しているだけでなく、生体においても何らかの生理作用を有している可能性が示唆された。現在、5週齢の精巣を用いて作製したcDNAライブラリーよりMIS遺伝子のクローニングを進めている。加えて、この断片より得られた配列をもとにビチオン標識したオリゴプローブを合成し、ノーザンおよびin situハイブリダイゼーションによりMIS遺伝子の発現部位等について検討中である。一方、鳥類のMIS受容体に関しては、哺乳類(ラット、ウサギ)MIS受容体遺伝子の構造を参考にプローブを作製し、ミュラー管の退縮が観察される8日胚ミュラー管を用いてRT-PCRを行ったところ、約500bpの断片が得られた。しかしながら、発現量がきわめて少ないため配列の分析までには至っていない。今後、早急にこの断片の配列の分析を進めていく予定である。

Mammalian and avian male embryos are observed to be induced by the secretion of microtubule inhibitory substances (MIS) from sperm cells. This study aims to advance the research on the physiological function and mechanism of MIS in birds, and to explore the relationship between the molecular structure and the genetic structure of MIS and its receptors. The gonad RNA was extracted from the embryo at 6, 7, and 8 days after the initial contraction, and the cDNA was adjusted. The information is provided by the Ministry of Foreign Affairs. The results of RT-PCR showed that the fragment of about 460bp was obtained. The results showed that 92.8%, 53.9% and 88.9%, 32.3% of the fragments were identical to each other. This suggests that the gonad may be involved in the withdrawal of the embryo, the sperm may be involved in the withdrawal of the egg at 5 weeks of age, the MIS may be involved in the withdrawal of the embryo, and the physiology of the organism may be involved. Now, 5 weeks later, the sperm is produced in the cDNA library. Add to this list the names of the missing pieces and the names of the missing pieces and the names of the missing pieces. A 500bp fragment was obtained by RT-PCR from the MIS receptor of birds and mammals. The analysis of the allocation of resources is carried out in the following ways: In the future, the analysis of the allocation of fragments in the early stage will be carried out.