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インゲンマメへの遺伝子導入系を用いたタンパク質分解系発現機構の解析

菜豆基因导入系统分析蛋白质降解系统表达机制

基本信息

批准号：
08740624
负责人：
山内大輔
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

インゲンマメ発芽種子での貯蔵タンパク質分解に主要な働きを担うシステインプロテアーゼEP-C1についてその遺伝子発現の解析を進めるために形質転換インゲンマメの作製を試みた。また、この遺伝子5'上流域に結合するタンパク質の検出を行い、新たな知見を得た。1、インゲンマメ形質転換体の作製:ここでは遺伝子発現を解析する際に必要なレポーター遺伝子について、これまでに用いていたβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子以外に発光クラゲの発光タンパク質GFP遺伝子の利用について検討した。その結果、インゲンマメ発芽子葉の傷で紫外線照射により発光を示したことから、GFPはこの研究目的には適さないことが示された。したがって、EP-C1遺伝子5'上流域にGUS遺伝子を融合したものをTiプラスミドベクターpBIN19に組み換えて、それをインゲンマメの胚軸の頂芽の部分に粒子銃で撃ち込み、形質転換体を得ることを試みた。ポリメラーゼ連鎖反応法により導入遺伝子の検出を行ったところ、およそ100個体中で1個体に導入遺伝子が検出された。しかし、この個体を鉢に移植する際に失敗した。この系の実用化にはこの移植における工夫が必要であることがわかった。2、DNA結合タンパク質検出:EP-C1遺伝子の5'上流域を4つに断片化し、これらに結合するタンパク質が存在することをゲル移動度シフト法によって明らかにしているが、競合実験の結果、こららはすべて同じタンパク質であることが示唆された。しかし、フットプリント法によってその結合配列を決定することはできなかった。

The analysis of seed production in the seed of the seed 5 'upper basin of water, water 1. The operation of the morphological and qualitative change body: this is the necessary time to analyze the occurrence of the gene, and the use of the β-GUS gene in addition to the GUS gene, the use of the GFP gene. The results of this study were as follows: 1. The development of the plant was affected by ultraviolet irradiation, 2. The development of GFP was affected by ultraviolet irradiation. In the 5 'upper region of EP-C1 gene, the GUS gene was fused to the Ti gene. In the region of EP-C1 gene, the GUS gene was fused to the Ti gene. In the region of EP-C1 gene, the GUS gene was fused to the Ti gene. In the region of EP-C1 gene, the GUS gene was fused to the Ti gene. In the case of the hybrid method, 1 out of 100 individuals was detected. This individual has failed to transplant. This is the first time I have ever seen such a thing. 2. DNA binding protein detection: EP-C1 gene 5 'upstream region 4: fragmentation, binding protein existence, binding protein mobility, binding protein existence, binding protein existence, binding protein The combination of the two is determined by the method.