コンカナバリンA遺伝子発現制御領域に結合するタンパク質の構造解析

与刀豆球蛋白 A 基因表达控制区结合的蛋白质的结构分析

基本信息

批准号：
05740484
负责人：
山内大輔
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tokyo Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ナタマメ(Canavalia gladiata)の種子貯蔵タンパク質であるコンカナバリンA(Con A)遺伝子の転写制御機構を解明するためには、その発現制御領域に結合するトランス作用因子について、調べることが肝要である。すでにCon A遺伝子の5'上流域に結合するタンパク質と同一もしくは類似したものがナタマメの7Sグロブリン型貯蔵タンパク質であるカナバリンの遺伝子5'上流域にも結合することを明らかにしている。本課題ではCon A遺伝子もしくはカナバリン遺伝子の5'上流域に結合するタンパク質の構造を明らかにすることを目的として研究を行い、以下の結果を得た。1.カナバリン遺伝子 5'上流域に結合するタンパク質の検出:インゲンマメの種子貯蔵タンパク質ファゼオリンの 5'上流域に結合するタンパク質として、CAN,CA-1,AG-1などが報告された(Kawagoe et al.1992)。カナバリン遺伝子の 5'上流域にもそれらとよく似た配列が存在するので、その部分のみを合成したプローブを用いて、ゲル移動度シフト法を行った。その結果、CAに富む結合配列とGCに富む配列の各々に結合するタンパク質が種子形成期の未熟種子の抽出液中に存在することが明らかになった。2.DNA結合タンパク質のクローニング:ナタマメ未熟種子から調製したポリA^+RNA由来のlambdagtll発現ライブラリーよりCon Aおよびカナバリン遺伝子の 5'上流域に結合するタンパク質をコードするcDNAの単離を試みた。約1×10^5個のクローンからなるcDNA発現ライブラリーを作製して、サウスウェスタン法によりスクリーニングを行った。CAに富む配列を含むオリゴヌクレオチドをプローブとした場合にのみ、それと結合するタンパク質を合成するファージクローンが得られた。今後はこのクローンのコードするタンパク質とDNAとの結合特異性をDNaselフットプリント法などにより確かめたい。

为了阐明con A基因的转录调节机制，即Canavalia glagiata的种子储存蛋白，研究与其表达控制区域结合的跨作用因子很重要。已经表明，与CON A基因的5'上游区域结合的相同或相似的蛋白质也与Canavalin基因的5'上游区域结合，Canavalin是豆的7S球蛋白型储存蛋白。在这一主题中，我们进行了研究，目的是阐明与CON基因或Canavalin基因的5'上游区域结合的蛋白质结构，并获得以下结果。 1。检测与canavalin基因的5'上游区域结合的蛋白质：CAN，CA-1，AG-1等。已报道是与豆类储存蛋白的5'上游区域结合的蛋白质（Kawagoe等人，1992年）。由于类似的序列存在于Canavalin基因的5'上游区域中，因此使用探针进行了凝胶迁移率转移，仅该部分仅合成该部分。结果，揭示了与种子形成过程中未成熟种子的提取物中存在与每个富含CA的结合序列和富含GC的序列结合的蛋白质。 2。DNA结合蛋白的克隆：我们试图分离编码一种蛋白质的cDNA，该cDNA与CON A A和CANAVALIN基因的5'上游区域结合的cDNA和来自lambdagtll表达式库的5'上游区域结合，该蛋白来自lambdagtll表达式库，该蛋白来自polya^+rna，该蛋白来自polya^+rna，从不成熟的豆种子中制成。制备了由大约1×10^5克隆组成的cDNA表达式文库，并通过西南方法进行筛选。只有当使用含有富含CA的序列的寡核苷酸时，探针才能合成结合其获得的蛋白质的噬菌体克隆。将来，我们想使用DNASEL足迹法验证该克隆和DNA编码的蛋白质之间的结合特异性。