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リグニン代謝系多重遺伝子族エ-テラーゼの構造と発現制御

木质素代谢系统多基因家族醚酶的结构及表达调控

基本信息

批准号：
08760074
负责人：
政井英司
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nagaoka University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リグニン分解で最も重要な反応段階であるβ-アリールエーテル開裂に関与するSphingomonas paucimobilis SYK-6のligDFE遺伝子下流領域の塩基配列を決定した。その結果、ligEの78-bp下流に795-bpのopen rerading frameが見いだされligGと命名した。ligGの推定アミノ酸配列はオーキシンで誘導されるタバコのグルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)様酵素と24%の相同性を示したのをはじめ、多くの植物由来GSTと相同性を示した。このことからβ-エ-テラーゼ・オペロンには3種の異なるGST様遺伝子(ligFEG)が存在することが示された。ligGは大腸菌において顕著な発現が見られなかったため、6XHis tagを持つ融合遺伝子として発現を行った。発現した約30kDaの蛋白質を用いてβ-エーテル開裂能とGSTの各種基質に対する反応性を調べたが、いずれの基質にも反応性を示さなかった。LigGはβ-アリールエーテル開裂以外の反応に関与しているものと考えられた。ligDFEGの発現制御を明らかにするために、各種リグニンモデル化合物の存在下とLB培地で生育したSYK-6のβ-エ-テラーゼ活性を比較したところβ-エーテル化合物によって4倍程度の活性化が見られた。この活性化が転写レベルでおきていることを確認するために、ligD内部に相同組換えによってlacZ遺伝子をレポーターとして導入した株を作製した。その株のLacZ活性はリグニンモデル化合物によって2倍程度の活性化が認められ、β-エーテル化合物によっては3倍以上の活性化が見られた。このことからβ-エ-テラーゼオペロンはそのレベルは高くないものの、β-エ-テラーゼ化合物によって特異的に転写誘導されることが示唆された。

The most important part of the decomposition is the β-cleavage of the Sphingomonas paucimobilis SYK-6, which determines the base alignment in the downstream region of the ligDFE. As a result, the 78-bp downstream of ligE and the 795-bp downstream of ligG were named. The putative acid sequence of ligG is shown to be 24% identical to that of GST. This is the case with three different GST vectors (ligFEG). LigG is the most common form of E. coli, and 6XHis tag is the most common form of fusion. The protein of about 30kDa was found to be able to modulate the reactivity of GST in various substrates. Ligg β-ray ray In the presence of various kinds of compounds, the β-teratogenic activity of SYK-6 was 4-fold higher than that of the β-teratogenic compounds. The activation of this gene is the same as that of the original gene. The LacZ activity of the plant is 2 times higher than that of the beta-lacZ compound, and 3 times higher than that of the beta-lacZ compound. The β-tetralogy compound was induced by the reaction of β-tetralogy compound.