ヒストンの新しい修飾に関する化学的・生物学的研究

新组蛋白修饰的化学和生物学研究

• 批准号: 08876065
• 负责人: 池上 晋
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08876065/
• 关键词: ヒトデ; ヒストン; 二量体; トランスグルタミナーゼ; 精子

クロマチン(染色質)は4種のコアヒストン(H2A、H2B、H3、H4)各2分子からなる8量体にDNAが約2回巻き付いたヌクレオソームを基本構造とし、さらにヒストンH1の結合を加えスーパーコイル、スーパーソレノイドなどの高次構造を形成している。本研究は、イトマキヒトデ精巣ヒストン画分に存在する、電気泳動上でコアヒストンよりも移動度の遅れたヒストン変異体分子群(移動の速いものからp28,p29A,p29B,p29C,p29D,p29E,p29Fと命名)のうちの1つ、p28を新しい精製法を用いて精製し、構造解析を行った。さらに、このヒストン変異体分子を認識するモノクローナル抗体を作製した。その結果から、p28はヒストンH2BのGln残基とヒストンH4のLys残基でε-(γ-Glu)Lys架橋が生じ、2量体化していることが判明した。その架橋部位は、ヒストンH2Bの9位のGln残基とヒストンH4の5位、または12位のLys残基であることが判明した。このp28をヒストンd(H2B-H4)と命名した。次に、イトマキヒトデ中期原腸胚から調製した細胞核を用いてヒストンH2Bとモノダンシルカダベリンを基質としてカルシウム存在下で反応を行い、反応物をSDS-PAGEで分離し、ゲルに365nmの光を照射し、蛍光を観察した。その結果、ヒストンH2Bのバンドが蛍光を発した。したがって、細胞核にトランスグルタミナーゼが存在し、ヒストンH2Bがトランスグルタミナーゼの基質となることが明らかになった。さらに、細胞核を分画し、核膜孔-ラミナ複合体画分を得た。この画分について、細胞核と同様の解析を行なったところ、トランスグルタミナーゼ活性が確認され、その比活性は細胞核画分よりも高かった。これらの結果はヒストンd(H2B-H4)形成に核トランスグルタミナーゼが関与することを強く示唆するものである。

Chromatin (Chromatin) 2 molecules each of 4 kinds of のコアヒストン (H2A, H2B, H3, H4) からなる 8-quantity DNA が About 2 times of いたヌクレオソームをBasic structureとし、さらにヒストンH1のcombinationをplusえスーパーコイル、スーパーソレノイドなどのHigh-order structureをformationしている. This study is about the existence of electrophoresis and electrophoresis.ヒストンよりもmobility の遅れたヒストン変 heterogeneous molecule group (moving のspeed いものからp 28, p29A, p29B, p29C, p29D, p29E, p29F (name), p28 (new purification method, purification method, structural analysis).さらに、このヒストン変Allogeneic moleculeをKnowledgeするモノクローナルantibodiesをProductionした.そのRESULTSから、p28はヒストンH2BのGln residue and p28はヒストンH4のLys residue The base is ε-(γ-Glu)Lys bridging, and the 2-quantity body is made clear. It was found that the Gln residue at position 9 of H2B and the Lys residue at position 12 of H4 were found to be the same.このp28をヒストンd(H2B-H4)とnamed した. Secondary, イトマキヒトデ metaphase gastrula embryos are prepared and the nuclei are used.てヒストンH2Bとモノダンシルカダベリンを matrix としてカIn the presence of ルシウム, it is necessary to perform anti-reflection operation, SDS-PAGE separation of anti-reaction substances, irradiation of 365nm light, and irradiation of light.そのRESULT, ヒストンH2Bのバンドが蛍光を発した.したがって、Cell nucleus にトランスグルタミナーゼがexistentし、ヒストンH 2Bがトランスグルタミナーゼの matrix となることが明らかになった.さらに、Nucleus をdrawし、Nuclear membrane pore-ラミナ complex draw をgetた.このpainting pointsについて、Nucleusと同様のANALYSISを行なったところ、トランスグルタミナーゼActivity confirmationされ、そのspecific activityはNuclear drawing pointsよりも高かった. The result of これらのはヒストンd(H2B-H4) is formed as a core トランスグルタミナーゼが关 and することを强く时するものである.

项目成果

T.Shimizu et al.: "A covalently crosslinked histone" Nature. 380. 32 (1966)

T.Shimizu 等人：“共价交联的组蛋白”自然。

T.Shimizu et al: "Structure of a covalently cross-linked form of corefistones present in the starfish sperm" Biochemistry. 12071-12079 (1997)

T.Shimizu 等人：“海星精子中存在的共价交联形式的 corefistones 的结构”生物化学。