家族性アルツハイマー病S182/STM2/E51遺伝子産物の同定と生理機能の検索

家族性阿尔茨海默病S182/STM2/E51基因产物的鉴定及生理功能研究

• 批准号: 08878154
• 负责人: 安達 喜文
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878154/
• 关键词: アルツハイマー病; アポトーシス; プレセリニン; APP; リン酸化; シグナルランスダクション; PARP; プレセニリン

早発性家族性アルツハイマー病の原因遺伝子としてS182(14q24.3),STM2(1q31.42),E5-1(1q31.42)がクローニングされ,同疾患の発症はこれら遺伝子内に頻発する変異に直接起因することが明らかとなった。脳神経細胞において重要な役割を果たしていると考えられるS182/STM2/E5-1遺伝子産物(プレセニリン)の生化学的基本特性および生理機能の検索を試みた。プレセニリン1および2について特異的な高抗原領域をコンピューター予測し,抗原ペプチドを合成し,4種の抗体を作製した。いずれの抗体もプレセニリン抗原に特異的であり,抗体価も十分であった。神経芽腫細胞,神経膠芽腫細胞,神経星状細胞をはじめとする各種ヒト培養細胞について^<32>P/^<35>S-Metで培養標識した後,免疫沈降を行い発現を調べた。プレセニリン1,2の細胞内発現はいずれの細胞においても非常に少なく,細胞内リン酸化も受けないことが明らかとなった。また,プレセニリン抗体免疫沈降複合体に付随するプロテインキナーゼ活性は検出されなかった。極微量タンパク質プレセニリンの機能解析にあたり,プレセニリンcDNAトランスフェクション/ステーブルトランスフォーマントのクローニングを行いつつある。これら早発性家族性アルツハイマー病の研究過程で,アルツハイマーアミロイド前駆体タンパク質(APP)に付随するプロテインキナーゼ活性を見出し,このAPP結合タンパク質cDNAを酵母ツ-ハイブリッド法にてクローニングした。このタンパク質は細胞外,膜貫通,細胞質内領域から構成されるレセプター様タンパク質で,膜上に局在することが明らかとなった。APP付随Pロテインキナーゼは活性化にMn^<2+>/Mg^<2+>を要求し,Ser/Thrキナーゼであった。現在,神経細胞アポトーシスにおける生理的役割を検索解析中である。また,アポトーシスにおいて重要な役割をするPARPの細胞内リン酸化も見出した。今後,神経細胞アポトーシスシグナルトランスダクションの分子機構を,プレセリニン,APP結合キナーゼに注目し,解明していきたい。

Early onset familial disease causes S182(14q24.3), STM2 (1q31.42),E5-1(1q31.42) are the direct cause of the disease, and the same disease causes different frequencies within the disease. The basic biochemical properties and physiological functions of S182/STM2/E5-1 gene products were studied. The first two classes of antibodies were prepared by the method of antigen selection. The antibody is very specific. Neuroblastoma cells, glioma cells, <32>astrocytes<35>, and various cell cultures are regulated by the immune sedimentation process after culture identification. The intracellular production of the protein 1 and 2 is very small, and the intracellular production is very small. The antibody immune sedimentation complex is responsible for the activity of the antibody. Micro-dust content: The function analysis of micro-dust content: The function analysis of micro-dust content: In the study of early onset familial disease, the activity of APP was detected in combination with the cDNA of APP. The cytoplasm is outside the cell, the membrane is through, and the cytoplasm is composed of the cytoplasm, and the membrane is on the surface. APP-dependent activation Mn^&lt;2+&gt;/Mg^&lt;2+&gt; requirements,Ser/Thr Now, in the analysis of the physiological service of the nervous cell, the physiological service of the nervous cell is divided into three parts. In addition, PARP's intracellular acidification can be seen in the cells. From now on, the molecular mechanism of the neuron's function and function will be clarified by the combination of APP and function.

项目成果

Y.Adachi: "In Vivo Poly(ADP-ribosyl)ation and Apoptosis." Nippon Nogeikagaku Kaishi. 70. 793-794 (1996)

Y.Adachi：“体内聚（ADP-核糖基）化和细胞凋亡。”

Y.Adachi: "Identification of Protein Phosphorylation Sites by Radiopeptide Mapping and Radiosequencing." Radite.Biol.Res.Commun.32(in press). (1998)

Y.Adachi：“通过放射性肽图谱和放射测序鉴定蛋白质磷酸化位点。”

Nishikimi,A.: "Examination of Signal Transduction-related Proteins by in vitro Kinase Assay and Phosphoamino Acid analysis." Radiat.Biol.Res.Commun.31. 232-242 (1996)

Nishikimi,A.：“通过体外激酶测定和磷酸氨基酸分析检查信号转导相关蛋白。”

Nishikimi,A.: "Isolation and Biochemical Analysis of Trace Cellular Proteins by Two-cycle Immunoprecipitation." Radiat.Biol.Res.Commun.31. 150-158 (1996)

Nishikimi,A.：“通过两循环免疫沉淀法对痕量细胞蛋白进行分离和生化分析。”

K.Ueda: "Possible Involvement of Alzheimer Amyloid Precursor Protein and Its Associated Protein Kinase Activity in Signal Transduction Pathway." ICR Annu.Rep.3. 42-43 (1996)

K.Ueda：“阿尔茨海默病淀粉样前体蛋白及其相关蛋白激酶活性可能参与信号转导途径。”