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新規冬眠特異的タンパク質(HP)の脳内存在様式と局在性に関する研究

研究大脑中新型冬眠特异性蛋白（HP）的存在和定位

基本信息

批准号：
09877014
负责人：
近藤宜昭
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kanagawa Academy of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、HP(HP-20、-25、-27のタンパク質複合体にHP-55が会合した構造を持つ)の脳脊髄液中での構造と、血液-脳脊髄液関門と考えられている脈絡叢を介してのHPの輸送の可能性を解析した。脳脊髄液中のHPの構造解析のためには、多量の脳脊髄液が必要となる。また、小動物であるシマリスの側脳室にカニューレを挿入し、麻酔下で脳脊髄液を採取するには、熟練と時間を要し、しかも、脳脊髄液中にHPが増加するのは、冬眠期間中(10月頃から翌年の3月頃まで)だけと限られている。このため、脳脊髄液採取可能な実験個体の作成、維持とその採取に多くの時間と労力を費やした。その結果集められた貴重なサンプルを解析した結果、血液からのHP分離に有用であったゲルろ過カラムは、脳脊髄液中のHPを吸着し分離不可能なことが明らかになり、血中HPと異なる性質を持つことが分かってきた。分離可能なゲルろ過カラムを選定し、native-、SDS-PAGE、western blottingを用いた解析から、脳脊髄液中のHPは、会合体からHP-55が解離した構造に変化していることが明らかになった。さらに、抗HP複合体抗体を用いた免疫組織化学的手法により、血液-脳脊髄液関門と考えられている脈絡叢に陽性反応が検出され、血中HPは冬眠期特異的に脳内へ輸送されることが示唆された。脈絡叢でのHP取り込み実験を行うため、脈絡叢標本の作成方法とそれを用いた生理実験系を検討した結果、スライス標本、摘出標本ともに作成後、経時的に細胞形態の崩壊が観察された。何れも、1時間以上のincubationにより、多くの細胞に形態的悪化が見られることから、これらの方法は摘出した脈絡叢の維持には適さないことが示された。今後、細胞あるいは組織培養などの他の方法の検討が必要であろう。

This year, HP (HP-20,-25,-27). This year, HP (HP,-25,-27) is used to analyze the possibility of manufacturing, blood-chiropractic fluids in chiropractic fluids. The HP in the chiropractic liquid is analyzed, and a large amount of the chiropractic liquid is necessary. In the laboratory, under the anaesthesia, in the chiropractic liquid, in the ripe time, in the HP in the chiropractic solution, in the middle of hibernation (from October to March), during hibernation. It is possible to make an individual system and maintain a large amount of energy consumption in a long period of time. The results of HP analysis, blood samples, blood samples, blood samples were analyzed. Separation may affect the selection of filters, native-, SDS-PAGE, western blotting analysis, HP in the spinal fluid, and the combination of HP-55 dissociation devices. Anti-HP complex antibody was detected by immuno-histochemical technique, blood-chiropractic fluid test, serum HP hibernating period specific antibody and blood-spinal fluid test. In this case, the HP is used to determine the results of the physiological system, the results of the physiological system, the standard text of the target, and the extraction of the header. after the device is finished, the cell morphology of the target is observed. For more than one time, the configuration of the incubation system and the multi-computer system should be optimized. The method should be used to maintain the message of the computer. From now on, the tissue culture will help you to find out the necessary ways to do so.