遺伝子組み換え抗腫瘍抗体の新らしいヒト型抗体作製法の開発

开发基因重组抗肿瘤抗体的新型人源抗体生产方法

• 批准号: 09877230
• 负责人: 岩橋 誠
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877230/
• 关键词: ヒト型抗体; targetting immunotherapy; CDR

CDR-humanized CC49のaffinity competition RIA assayCDRを1種または2種づつ入れ替えた7種類のCDRヒト型化variant HuCC49について、^<125>I-labeled humanized CC49をcompetitorとしてcompetition RIA assayを行った。H鎖とL鎖variantsはCDR1、CDR2あるいはその両者を入れ替えてもaffinityは変化しなかったが、CDR3を入れ替えるとほとんどcompetitionを認めなかった。H鎖のvariantはいずれもaffinityが低下したが、CDR2のみ部分的なcompetitionを認めた。Affinity costantでもL鎖のCDR1,CDR2を入れ替えてもaffinityは変化せず,H鎖ではCDR2を入れ替えると1/300に低下し、CDR1,CDR3を入れ替えるとaffinityを認めなくなった。すなわち、L鎖CDR1とCDR2をヒトアミノ酸と入れ替えることは可能であり、H鎖CDR2は部分的に入れ替え可能であることが示唆された。CDR-partial humanizationによるCDR-humanized CC49の作製と発現・精製、Competitionassay以上の結果に基づき、入れ換えることによりaffinityを低下させないCDRはすべてヒト由来のCDRと入れ換え、入れ換えによりaffinityを低下させてしまうCDRは抗idiotype抗体と反応性の高いCDRを中心に、Padranらのspecificity determining regions(SDRs)に相当するアミノ酸はそのままで、他をヒト由来のアミノ酸と入れ換えることとし、CDRヒト型化CC49遺伝子と同様にしてPCRを利用して組換え遺伝子を作製した。SDRsに含まれないH鎖CDR2のアミノ酸をヒト由来のものと入れ替えた(60:Asn→Ser,61:Glu→Gln,62:Arg→Lys,64:Lys→Gln)H2M60-62,64を作製し、同様にL鎖のCDR1,2を完全にヒトアミノ酸と入れ替えCDR3はSDRsに属さないアミノ酸を入れ替えた(97;Thr→Ser)L1,2+L3M97を作製した。Competition assayから得られたaffinity constant(×10^<-8>M)は親抗体HuCC49の3.2に対し、H2M60-62,64は2.22,L1,2+L3M97は1.42であり、これらH鎖variantとL鎖variantを組み合わせたH2M60-62/L1,2+L3M97でも1.15と軽度低下するのみであった。さらにH2M60-62/L1,2+L3M97のマウスCC49を投与された4名の患者血清との反応性を検討すると,HuCC49に比較して著しく低下し、controlと比較してもその反応性は平均1.4倍と極めて低免疫原性であった。

Cdr-humanized CC49 <s:1> affinity competition RIA assayCDRを1 kind また <e:1> 2 kinds づ in れ replace えた7 kinds <s:1> CDRヒト typified variant HuCC49に て て ^<125>I-labeled humanized CC49をcompetitorと て てcompetition RIA assayを lines った. H lock と L lock variants は CDR1 and CDR2 あ る い は そ の struck the を into れ for え て も affinity は variations change し な か っ た が, CDR3 を into れ for え る と ほ と ん ど competition を recognize め な か っ た. The H lock has variant, を, ずれ, ずれ affinity, が, and the なcompetitionを of the <s:1> み part of the CDR2 recognize めた. Affinity costant で も L lock の CDR1 and CDR2 を into れ for え て も Affinity は variations change せ ず, H lock で は CDR2 を into れ for え る と に し, 1/300 CDR1, CDR3 を into れ for え る と Affinity を recognize め な く な っ た. す な わ ち, L lock CDR1 と CDR2 を ヒ ト ア ミ ノ acid と into れ for え る こ と は may で あ り, H lock CDR2 は part for え に into れ may で あ る こ と が in stopping さ れ た. CDR-partial humanizationによるCDR-humanized CC49 の cropping と 発 is refined, more than Competitionassay の results に づ き, change into れ え る こ と に よ り affinity を low さ せ な い CDR は す べ て ヒ ト origin の CDR と into れ え, into the れ change え に よ り affinity を low さ せ て し ま う CDR は idiot ype antibodies と anti応 <s:1> high <s:1> <s:1> CDRを center に, Padranら <s:1> specificity determining Regions (SDRs) に quite す る ア ミ ノ acid は そ の ま ま で, he を ヒ ト origin の ア ミ ノ acid と change into れ え る こ と と し, CDR ヒ ト type change CC49 heritage 伝 son と with others に し て PCR を using し て group in え heritage を son 伝 system し た. SDRs に containing ま れ な い H lock CDR2 の ア ミ ノ acid を ヒ ト origin の も の と into れ for え た (60: the Asn - Ser, 61: Glu - Gln, 62: Arg and Lys, 64: Lys and Gln) H2M60-62 (し, with others in the を cropping に L lock の CDR1, 2 を completely に ヒ ト ア ミ と into ノ acid れ for え CDR3 は SDRs に genus さ な い ア ミ ノ acid を into れ for え た (97; Thr - Ser) L1, 2 + L3M97 を cropping し た. The Competition assay ら ら yields られたaffinity Constant (10 ^ < - > 8 M) は antibody affinity HuCC49 の 3.2 に し seaborne, H2M60-62 (は 2.22, L1, 2 + L3M97 は 1.42 で あ り, こ れ ら H lock the variant と L lock the variant を group み close わ せ た H2M60-62 / L1, 2 + L3M9 7で で 1.15と軽 degree is low する みであった. さ ら に H2M60-62 / L1, 2 + L3M97 の マ ウ ス CC49 を cast with さ れ た four の patients serum と の anti 応 sex を beg す 検 る と, HuCC49 に compare し て the し く し, control と compare し て も そ の anti 応 sex は 1.4 times the average と extremely め て low immunogenicity で あ っ た.

项目成果

Makoto Iwahashi: "Autologous mixed lymphocyte reaction and postoperative prognosis in patients with gastric carcinoma" Oncology Reports. 3. 45-48 (1996)

Makoto Iwahashi：“胃癌患者的自体混合淋巴细胞反应和术后预后”肿瘤学报告。

Takuya Tsunoda: "CIinical efficacy of adoptive immunotherapy by IL-4 activated tumor-infiltrating ymphacytes in patients with advanced caaur" International Journal of Clinical Oncology. 2. 202-207 (1997)

Takuy​​a Tsunoda：“IL-4 激活的肿瘤浸润性淋巴细胞过继免疫治疗对晚期癌症患者的临床疗效”《国际临床肿瘤学杂志》。

Hiroki Yamaue: "Clinical effects of chemoimmurotherapy for patients with peritoneal carcinomatosis." Oncology Reports. 4. 583-589 (1997)

Hiroki Yamaue：“化学免疫疗法对腹膜癌病患者的临床效果。”

Takuya Tsunoda: "Clonal and functional analysis for the augmentation of tumor-infiltrating lymphocytes by interleukin 4" British Journal of Cancer. 74. 1085-1089 (1996)

Takuy​​a Tsunoda：“白细胞介素 4 增强肿瘤浸润淋巴细胞的克隆和功能分析”英国癌症杂志。

Takuya Tsunoda: "Clinical and functional analysis for the augmentation of tumor-infiltrating lymphocytes by interleukin 4" British Journal of Cancer. 74. 1085-1089 (1996)

Takuy​​a Tsunoda：“白细胞介素 4 增强肿瘤浸润淋巴细胞的临床和功能分析”英国癌症杂志。