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網膜芽細胞腫由来細胞に対する分化誘導機構との臨床応用への可能性の解明

视网膜母细胞瘤来源细胞分化诱导机制的阐明及临床应用的可能性

基本信息

批准号：
09877333
负责人：
谷原秀信
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、神経網膜の分化誘導状態にある初期発生におけるカドヘリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子群(カドヘリシ-4〜-13やプロトカドヘリン)の時間的・空間的発現パターンをin vivoにおいて、in situハイブリダイゼーション・免疫組織染色の手法を用いて詳細まで明らかにし、網膜の細胞ごとに特異的なカドヘリンが発現していることを明らかにした。これにより、網膜の発生・分化・機能維持にカドヘリンが深く関わり、重要な役割を果たしている可能性が示唆された。そこで、昨年度からの研究に引き続き、カドヘリン-8、-11に特異的なFitc合成アンチセンスオリゴヌクレオチドを不活化センダイウイルスに融合させて作成したHVJ-cationic-1iposome法を用いて、培養網膜芽細胞腫由来細胞(Y-79細胞)の細胞核への遺伝子導入を試みた。30分間培養後、蛍光顕微鏡下での導入の確認を行ったところ、培養細胞において高頻度で細胞核におけるFitcによる蛍光は観察できたが、RT-PCR法および免疫染色にてカドヘリシ-8、-11の発現の確認を行ったところ、導入した遺伝子の発現は確認できなかった。また、遺伝子導入を試みた細胞を様々な神経網膜に特異的なマーカーとなる抗体(MAP-2、calbindin、TH、ChATなど)で免疫染色を行ったが、免疫染色性は確認できなかった。

Cell adhesion molecules in the early stages of differentiation of the retina The temporal and spatial appearance of the retinal cells in vivo, in situ, and in situ is described in detail in the immunohistochemical staining method. The possibility of this phenomenon, the development, differentiation, and maintenance of retinal function, is also discussed. In the past year, the research on the synthesis and fusion of specific Fitc genes was carried out in vitro, and the gene transfer of Y-79 cells was tested by HVJ-cationic-1iposome method. After 30 minutes of culture, the introduction of Fitch was confirmed by fluorescence microscopy. The cells were cultured at high frequency. The detection of Fitch was confirmed by RT-PCR and immunostaining. The detection of Fitch-8 and Fitch-11 was confirmed by fluorescence microscopy. Immunostaining was carried out to confirm the presence of antibodies (MAP-2, calbindin, TH, ChAT) specific to the retina.