遺伝子改変コクサッキーウイルスＢ群３型を用いた新規腫瘍溶解性ウイルス療法の開発

使用转基因柯萨奇病毒 B 型 3 型开发新型溶瘤病毒疗法

• 批准号: 13J04594
• 负责人: 宮本 将平
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J04594/
• 关键词: コクサッキーウイルスB群3型; miRNA; GM-CSF; GMP準拠製造; 前臨床試験; Coxsackievirus B3; miRNA相補配列搭載CVB3; miR-1; miR-217; ショ糖密度勾配超遠心; mGM-CSF; mGM-CSF搭載CVB3

平成26年度には以下の研究を実施した。①昨年度に引き続き抗腫瘍免疫誘導能向上の為のコクサッキーウイルスB群3型（CVB3）の遺伝子改変を行い、昨年度作製したプロテアーゼ切断法よりもさらに高効率に切断可能な新たなプロテアーゼ切断法を開発し、効率良くGM-CSFの発現を可能としたCVB3-GM-CSFを作製した。次に、本CVB3-GM-CSFを用いたin vivo抗腫瘍効果の検討を行ったところ、CVB3-GM-CSF投与群は野生型CVB3投与群と比較して有意に腫瘍の退縮を認めた。以上のように我々はエンテロウイルスを用いた初の抗腫瘍効果増強が可能な高効率GM-CSF発現ウイルスの開発に成功した。②安全性向上遺伝子改変コクサッキーウイルスB群3型（CVB3）において、GMP準拠の試薬・機材を用い、ガス透過性バッグを使用した無血清浮遊細胞培養法を開発し、従来のウイルス製造法の約100倍の製造に成功した。その後のウイルス精製法においては、臨床試験を視野に入れた限外濾過法および密度勾配超遠心法を組み合わせた精製法を開発した。本精製後のSDS-PAGE後ゲルを用いたオリオール蛍光染色による夾雑物タンパク質確認試験おいて、精製物はウイルス培養液上清と比べ、夾雑物バンドが殆ど確認されずウイルスバンドが1本のみ確認され、夾雑物を殆ど除去出来ていることが示唆された。全行程を経ての力価及び品質は前臨床試験に供することが十分可能なレベルであった（無菌性試験陰性、エンドトキシン検出限界以下、マイコプラズマ試験陰性）。現在、本製造法で作製した試験物を用いて、サル及びマウスにおける毒性試験を実施中である。

The following studies have been conducted in Pingcheng in the year 26. The main results are as follows: (1) Last year, the anti-virus immune program was able to improve the performance of group B group 3 (CVB3), and last year, it was possible to improve the performance of the new anti-virus immune system. It is possible to improve the performance of GM-CSF. For the second time, this CVB3-GM-CSF uses the anti-in vivo anti-virus, CVB3-GM-CSF and group to compare the wild type CVB3 with the group and intentionally return the message. The above results show that it is possible for GM-CSF to have a high rate of success when it comes to the results of the initial anti-drug campaign. (2) the safety was improved, and the safety was improved. Type B3 (CVB3) screening, GMP preparation for the use of materials, and the use of serum-free cell culture method were used to improve the safety. In the future, you can use the method to improve the performance of the system, and the density of the system is higher than that of the control group. After the SDS-PAGE, you can use the light staining method to make sure that the liquid is clear, the product is completely clear, the product is completely clear, and the product is completely removed. It is very likely that the whole journey will be affected by the strength of the whole journey and the temperature in the front of the bed. It is very likely that there will be no bacteria, no bacteria. At present, this method is used to treat drugs, drugs, and drugs in the process of application.

项目成果

Dual microRNA-regulated oncolytic coxsackievirus B3 infection displays antitumor activity with attenuated pathogenicity in mice.

双重 microRNA 调节的溶瘤柯萨奇病毒 B3 感染在小鼠中表现出抗肿瘤活性，且致病性减弱。

• 发表时间: 2013
• 作者: Shohei Miyamoto;Hiroyuki Inoue;Miyako Sagara;Beibei Wang;Koichi Takayama;Hiroyuki Shimizu;Yoichi Nakanishi;Kenzaburo Tani
• 通讯作者: Kenzaburo Tani

九州大学 テクノロジーフォーラム

九州大学技术论坛

• 发表时间: 2014
• 作者: Shintaro Taki;Haruhiko Kamada;Masaki Inoue;Kazuya Nagano;Yohei Mukai;YasuoTsutsumi;Shin-ichi Tsunoda;山中聡・弘中豊・尾崎研一;宮本 将平
• 通讯作者: 宮本 将平

Development of the novel oncolytic coxsackievirus therapy for the clinical trial.

开发用于临床试验的新型溶瘤柯萨奇病毒疗法。

• 发表时间: 2015
• 作者: Haruhiko Kamada;Shintaro Taki;Kazuya Nagano;Masaki Inoue;Daisuke Ando;Yohei Mukai;Kazuma Higashisaka;Yasuo Yoshioka;Yasuo Tsutsumi;Shin-ichi Tsunoda;宮本 将平
• 通讯作者: 宮本 将平

INFECTION WITH DUAL MICRORNA TARGETED COXSACKIEVIRUS B3 ABROGATES ITS PATHOGENICITY RETAINING ONCOLYTIC ACTIVITY

双微RNA靶向柯萨奇病毒B3的感染消除了其致病性并保留了溶瘤活性

• 发表时间: 2013
• 作者: Shohei Miyamoto;Hiroyuki Inoue;Miyako Sagara;Beibei Wang;Koichi Takayama;Hiroyuki Shimizu;Yoichi Nakanishi;Kenzaburo Tani
• 通讯作者: Kenzaburo Tani

MicroRNA-targeted coxsackievirus B3 infection markedly reduces its toxicity without losing its potent oncolytic activity.

MicroRNA 靶向柯萨奇病毒 B3 感染可显着降低其毒性，同时又不失去其强大的溶瘤活性。

• 发表时间: 2013
• 作者: Shohei Miyamoto;Hiroyuki Inoue;Miyako Sagara;Beibei Wang;Koichi Takayama;Hiroyuki Shimizu;Yoichi Nakanishi;Kenzaburo Tani
• 通讯作者: Kenzaburo Tani