脊索動物ワカレオタマボヤにおけるＲＮＡｉスクリーニングを用いた卵形成機構の研究

利用 RNAi 筛选脊索动物 Guakareotamaboya 卵子发生机制的研究

• 批准号: 13J01402
• 负责人: 表迫 竜也
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J01402/
• 关键词: ワカレオタマボヤ; DNAi; 母性因子; 動植物軸形成; スクリーニング; 動植軸形成; RNAi; 卵成熟

本研究ではワカレオタマボヤを用いて母性因子の網羅的な遺伝子スクリーニングを行うことを行った。それに先立って昨年度までに確立したDNAi法が母性因子の機能阻害に有効であるかどうかの検証を行った。この為に母性タンパク質として知られるβ-cateninのPCR産物を卵巣内顕微注入法を用いて取り込ませた。この結果、細胞接着および内胚葉の分化に異常が見られた。このことから、ワカレオタマボヤにおいて卵巣内顕微注入法を用いることで確かに母性因子の機能阻害が可能であることが示された。次に当初の計画通りスクリーニングを進めた。この結果、メス特異的な遺伝子ライブラリーの３０００クローン(５６．９％)の遺伝子の機能解析を行い、７個の原因遺伝子の特定を行った。得られた７個の遺伝子は初期胚発生期に①細胞分裂、②細胞接着、③タンパク質の核内輸送、④遺伝子の複製、修復、組み換えに関わるものであった。以上の結果から、ワカレオタマボヤにおいて卵巣内顕微注入法を用いるDNAiスクリーニングによって、これまで脊索動物では困難であった母性因子のスクリーニングが有効であることが示された。これらの結果をもとに現在論文投稿の準備を行っている。

在这项研究中，使用Wakareo Tamaboya进行了全面的母体因素遗传筛查。在此之前，我们研究了直到去年建立的DNAi方法是否有效抑制母体因素的功能。由于这个原因，使用摩陶内微注射掺入了β-catenin的PCR产物，称为母体蛋白。结果，在细胞粘附和内胚层分化中观察到异常。这表明Wakareotaboya中的载体内显微注射方法确实可以抑制母体因素的功能。接下来，筛选按原计划进行。结果，对女性特异性基因文库的3,000个克隆（56.9％）的功能分析进行了识别，以鉴定七个致病基因。获得的七个基因参与1）细胞分裂，2）细胞粘附，3）蛋白质的核转运和4）早期胚胎发育期间基因复制，修复和重组。上述结果表明，在Wakareotamaboya中使用摩陶内微注射的DNAi筛查有效地筛选了母体因素，而孕产妇因素以前很难在弦中。基于这些结果，我们目前正在准备提交论文。

项目成果

DNA interference: new gene silencing method in the appendicularian Oikopleura dioica

DNA干扰：阑尾植物Oikopleura dioica的新基因沉默方法

• 发表时间: 2015
• 作者: Tatsuya Omotezako;Takeshi A. Onuma;Hiroki Nishida;Tatsuya Omotezako
• 通讯作者: Tatsuya Omotezako

(1)RNA interferenceとDNA interference: 脊索動物ワカレオタマボヤにおける遺伝子サイレンシングシステム

(1)RNA干扰和DNA干扰：脊索动物Guakareotamaboya中的基因沉默系统

• 发表时间: 2014
• 作者: Yang;Y.;Endo;M.;Suziki;K.;Hidaka;K.;Sugiyama;H.;表迫竜也
• 通讯作者: 表迫竜也

DNA interference: DNA-induced gene silencing in the appendicularian Oikopleura dioica

• DOI: 10.1098/rspb.2015.0435
• 发表时间: 2015-05-22
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE ROYAL SOCIETY B-BIOLOGICAL SCIENCES
• 影响因子: 4.7
• 作者: Omotezako, Tatsuya;Onuma, Takeshi A.;Nishida, Hiroki
• 通讯作者: Nishida, Hiroki

RNA interference and DNA interference: two gene silencing systems in the appendicularian Oikopleura dioica

RNA干扰和DNA干扰：阑尾Oikopleura dioica中的两个基因沉默系统

• 发表时间: 2015
• 作者: Tatsuya Omotezako;Takeshi A. Onuma;Hiroki Nishida;Tatsuya Omotezako;Tatsuya Omotezako
• 通讯作者: Tatsuya Omotezako

Application of TALEN-, CRISPR/Cas9-mediated Gene Knock-in methods in the appendicularian, Oikopleura dioica and analysis of DNAi method

TALEN、CRISPR/Cas9介导的基因敲入方法在阑尾、Oikopleura dioica中的应用及DNAi方法分析

• 发表时间: 2014
• 作者: Takenaka;T.; Endo;M.; Suzuki;Y.; Yang;Y.; Emura;T.; Hidaka;K.; Kato;T.; Mitata;T.; Namba;K.; Sugiyama;H;Tatsuya Omotezako
• 通讯作者: Tatsuya Omotezako