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哺乳類における安定な一倍体ＥＳ細胞株の樹立とその利用

哺乳动物稳定单倍体ES细胞系的建立及其应用

基本信息

批准号：
13J07703
负责人：
高橋沙央里
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Osaka University (2014)Tokyo Medical and Dental University (2013)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J07703/
关键词：
エピゲノム幹細胞 DNAメチル化 1倍体ES細胞株細胞周期 Epiblast stem cell

项目摘要

哺乳類のゲノムは父親と母親からそれぞれの染色体1組（Haploid）を受け継いだ2倍体（Diploid）で存在する。これは、(1)常染色体劣性遺伝病などにおいて片親由来の染色体の異常を補うこと、(2)片親性発現を示すインプリンティング遺伝子の存在から、哺乳類が2倍体で生存する生物学的意義は大きい。しかし、基礎研究において新規遺伝子機能の探索を行う場合、2倍体のヘテロ変異では表現型が見えないことが多い。そこで、本研究では「哺乳類の細胞で1倍体のまま安定に生存できる細胞株を樹立すること」を目指した。これらの細胞株が樹立できれば、遺伝型と表現型の関係を直接的に明らかでき、基礎研究における大きな貢献が期待される。先行研究や自身の実験により、現在までのところフローサイトメーターの使用によりマウスにおける1倍体ES細胞株の培養が可能となった。ところが存在する全ての1倍体ES細胞株は安定に長期培養することが不可能であり、また、ES細胞からの分化誘導に伴い1倍体細胞は2倍体化する。さらに、現在のところエピジェネティックな安定性も確立されていない。本研究では上記の問題点を解決するために「1倍体細胞の長期安定培養」、「1倍体分化細胞の樹立」および「エピジェネティックな安定性の維持」を可能にする培養条件の決定を目的とした。その結果、「1倍体細胞の長期培養方法の確立」および「エピジェネティックな安定性の維持」を解析するための解析手段として、ゲノムの5hmCを簡易的に検出する方法の開発に成功した。

Mammals have a Haploid chromosome that can be divided into diploids from both father and mother. The biological significance of (1) autosomal genetic defects,(2) chromosomal abnormalities,(3) chromosomal genetic defects, and (4) mammalian diploids. Basic research, new gene function exploration, diploidy, diploidy and phenotype This study is aimed at establishing cell lines that are stable and stable in mammalian cells. The relationship between cell lines and phenotype is expected to be directly related to basic research. First, we studied the culture of ES cell lines, and now we can culture ES cell lines. It is impossible to induce the differentiation of ES cells with diploidy if the whole ES cell line is stable for a long time. The stability of the system is established. The purpose of this study is to solve the problems mentioned above, such as "long-term stable culture of haploid cells","establishment of haploid differentiated cells" and "maintenance of stability of haploid cells". Results: "Establishment of long-term culture method of monoploid cells" and "Maintenance of stability of cells" were analyzed and developed successfully.