アンジオテンシンによる脳血管老化機序の解明と認知症治療への展開

血管紧张素诱导脑血管衰老机制的阐明及其在痴呆治疗中的进展

• 批准号: 22K11829
• 负责人: 閔 莉娟
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K11829/
• 关键词: 脳血管細胞; 脳血管老化; 認知機能; アルツハイマー病; シャペロン介在性オートファジー; LAMP-2A; 認知機能低下; 脳血管老化・保護; アミロイドβ蓄積; オートファジー; レニン・アンジオテンシン系

[目的]　①アンジオテンシン（Ang）II刺激が脳血管細胞を老化させ、認知機能を低下させることを個体レベルで実証する。②AngIIが脳血管老化を促進するメカニズムをシャペロン介在性オートファジー（CMA）に着目して明らかにする。③AngII-CMA-脳血管老化-認知機能低下の関係を明らかにする。[方法] マイクロ浸透圧ポンプでAngIIを脳室内投与したC57BL/6Jマウスからの脳血管とAngII連日刺激した脳血管平滑筋細胞（BVSMC）を用い、老化関連βガラクトシダーゼ(SA-β-gal)染色により脳血管細胞老化を評価した。老化関連因子p53やp16などCDKIの発現、CMA経路関係因子LAMP-2A、Hsc70、Hsp90、CHIPなどの発現はAngII連日刺激したBVSMCのライセ―トを用い、ウェスタンブロッティング法にて測定した。また、LAMP-2Aの老化における役割を明らかにするため、LAMP-2Aのコンストラクトを作製してきた。[結果] AngIIの脳室内投与マウスの脳血管のSA-β-gal染色実験は一回だけ行ったため、明らかに証明できるデータを得なかったが、AngIIで連日刺激によりBVSMCの老化細胞数とp53、p21、p27、p16などCDKIの発現は増加することが認められた。また、BVSMCへのAngII刺激によりCMA経路関係因子の中、LAMP-2Aだけの発現は減少することが認められた。遺伝子LAMP-2A、タグFLAGを含むpcDNA3.1(+)組み換えプラスミドを精製でき、BVSMCにトランスフェクションしてLAMP-2Aの高発現が確認された。これから、得た組み換えプラスミドを用いてLAMP-2Aの老化作用を明らかにする。[結論] AngIIがCDKIを介して脳血管細胞を老化させる可能性が示唆された。そのメカニズムにはCMA経路関係因子であるLAMP-2Aが深く関与している可能性も示唆された。

[Objective] ① Ang II stimulates vascular cell aging, cognitive function decline, and individual development. 2. AngII promotes vascular aging. (3) The relationship between AngII-CMA-vascular aging-cognitive impairment is clear. [Methods] AngII staining was used to evaluate vascular smooth muscle cells (BVSMC) aging. AGE-related factors p53, p16, CDKI development, CMA pathway factors LAMP-2A, Hsc70, Hsp90, CHIP development, and AngII stimulation were determined by BVSMC's development strategy. The LAMP-2A aging process is described as follows: [Results] The SA-β-gal staining of BVSMC in vitro demonstrated that the expression of p53, p21, p16 and CDKI increased in vitro. The expression of LAMP-2A in the medium and medium of AngII stimulation of BVSMC decreased significantly. The high activity of LAMP-2A and FLAG in BVSMC was confirmed by purification of LAMP-2A and FLAG containing pcDNA3.1(+) group. The aging effect of LAMP-2A is clearly demonstrated in the following applications: [Conclusion] AngII may play an important role in vascular cell aging. CMA-2A is a close relationship between the two.

项目成果

愛媛大学大学院医学系研究科 医化学・細胞生物学 研究紹介

爱媛大学医学研究科医学化学/细胞生物学研究介绍