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エクソソーム表面抗原を利用した核酸医薬の細胞内送達法の開発

利用外泌体表面抗原开发核酸药物的细胞内递送方法

基本信息

批准号：
22KJ2502
负责人：
大山将大
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

今年度はアビジン-ビオチン相互作用をリンカー構造に取り入れたエクソソーム随伴型抗体結合型核酸（以降、EPEIOS）を設計し、主に分子構造の最適化とin vitro系有効性評価を行った。(a) EPEIOSの合成条件検討：本システムを構成する3種類の分子（ビオチン標識抗体、ストレプトアビジン、ビオチン標識核酸）の組成や反応条件を種々検討した。複合体形成能をゲルシフトアッセイによって評価したところ、ビオチン標識抗体：ストレプトアビジン：ビオチン標識核酸＝１：２：１の比率で反応させた条件において高効率でEPEIOSを形成可能であることを見出した。(b) EPEIOSの細胞内取込効率評価：標的microRNAに相補的な配列を有するアンチセンス核酸（anti-miR核酸）に蛍光標識を施しEPEIOSに搭載した。共焦点レーザー顕微鏡を用いてEPEIOSの肺がん細胞内取込効率を評価したところ、従来型のエクソソーム随伴型薬物送達システム（ExomiR-Tracker）と比較して高い細胞内送達が確認された。(c) EPEIOSの細胞内活性評価：肺がん細胞においてanti-miR核酸搭載EPEIOSによる標的microRNAの機能阻害効果をデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイにより評価したところ、EPEIOS処理群で従来型のExomiR-Trackerをはるかに上回る機能阻害効果が確認された。なお、予備検討ではあるが、EPEIOSの担癌マウスにおける臓器分布について比較的良好な結果が得られているため、次年度は引き続きin vivo系の有効性評価を進める予定である。

This year, the design and optimization of molecular structure of antibody-binding nucleic acid (EPEIOS) in vitro system have been carried out. (a)EPEIOS synthesis conditions: This system consists of three kinds of molecules (virologen antibody, virologen, virologen nucleic acid) composition and reaction conditions are discussed. The ratio of EPEIOS to complex formation is 1:2:1, and the ratio of EPEIOS to complex formation is 1:2. (b)Evaluation of EPEIOS Intracellular Extraction Efficiency: Targeted microRNAs complement nucleic acids (anti-miR nucleic acids) and fluorescent markers are applied to EPEIOS EPEIOS is used to evaluate the intracellular delivery efficiency of EPEIOS by confocal microscopy, and to compare the intracellular delivery efficiency of EPEIOS with that of EPEIOS. (c)Evaluation of intracellular activity of EPEIOS: Functional inhibition effect of anti-miR nucleic acid carrying target microRNA of EPEIOS in lung cells was evaluated and functional inhibition effect of exomiR-Tracker of EPEIOS treatment group was confirmed. EPEIOS has a good result in comparison with the distribution of tumor cells in vivo, and the next year's evaluation of the effectiveness of vivo system has been carried out.