Comparison of humoral responses induced by COVID-19 infection and mRNA vaccines.

COVID-19 感染和 mRNA 疫苗诱导的体液反应的比较。

基本信息

批准号：
22KJ2622
负责人：
仁田原裕子
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2622/
关键词：
ワクチン免疫 SARS-CoV-2 メッセンジャーRNAワクチン

项目摘要

昨年度は、COVID-19ワクチン接種者と、COVID-19患者の血清ライブラリ選抜とウイルス中和試験、及びペプチドアレイの作成を実施した。血清ライブラリ選抜においては、COVID-19患者群のうち、全身性の臨床症状を経た中等症者と重症者の患者血清と、ワクチン接種者血清からなる血清ライブラリを選抜した。その結果、患者群より２０サンプル、ワクチン接種者群より２１サンプル、計４１サンプルを得た。それぞれの群の血清は、受容体結合ドメイン(RBD)に対する抗体価が同程度であるものを選抜した。これらの血清を使用し、ウイルス中和試験を実施した。BSL3実験室で、Wuhan株のSARS-CoV-2を使用し、両群血清を用いたウイルス中和試験を行い、感染培養細胞の細胞変性効果の程度でウイルス中和活性を測定した。この中和活性の強弱の結果をもとに、エピトープ解析対象とする血清を、患者血清１０サンプル、ワクチン血清５サンプル選別した。両群のウイルス中和能は、ばらつきが同程度となるよう考慮した。次に、RBDのアミノ酸全長配列をもとに、ペプチドアレイを作成した。具体的には、RBD配列のN末端から15ペプチド鎖ずつ、3アミノ酸ずらしで、セルロースメンブレン上にペプチドスポットアレイを作成した。このアレイを、両群より選抜した血清と反応させた。反応のあったペプチドを、化学発光法により半定量評価し、各血清のエピトーププロファイルを得た。

去年，我们对Covid-19的疫苗接种个体和COVID-19患者进行了血清库的选择和病毒中和测试，并进行了肽阵列的制备。在血清库的选择中，从COVID-19患者中选择了由中度和严重病例的患者血清组成的血清库和严重病例的患者血清。结果，获得了41个样品，总共来自患者组的20个样本，并从接种疫苗的组中获得了21个样本。选择与受体结合结构域（RBD）的抗体滴度相似的抗体滴度的人的血清。这些血清用于进行病毒中和测试。使用两组的血清在BSL3实验室中使用Wuhan的菌株SARS-COV-2进行了病毒中和试验，并根据感染培养细胞的细胞质效应程度测量了病毒中和活性。根据中和活性的强度结果，选择10例患者血清和5种疫苗血清样品的表位分析的10个血清样品。两组的中和能力的病毒在变异方面被认为相似。接下来，基于RBD的全长氨基酸序列创建肽阵列。具体而言，从RBD序列的N端，在15个肽链中具有3个氨基酸移位的纤维素膜上制备肽斑阵列。阵列与从两组中选择的血清反应。通过化学发光进行半量化的肽，以获得每种血清的表位谱。