The role of PKC Isotypes in cell adhesion, spreading an migration

在动物中，细胞-基质接触的形成对胚胎发生和伤口愈合至关重要。这种结构的组装和动力学可以在组织培养中进行研究，并且已经发现大量的蛋白质定位在这些接触位点的细胞质表面，在那里它们被认为是将微丝端连接到质膜。然而，关于细胞-基质粘附位点的调控，即它们在细胞外和细胞内信号的作用下的组装、成熟和拆卸，我们知之甚少。在这个项目中，我们想研究蛋白激酶C （PKC）在这些事件中的作用。初步数据描述了该激酶家族的几种同型与肌动蛋白，血管蛋白和talin的相互作用，这些都是细胞-基质接触的基本组成部分。我们建议详细研究这些相互作用，并将这些研究扩展到其他细胞接触蛋白。我们将跟踪PKC同型在细胞粘附、扩散和迁移过程中的易位。通过免疫荧光和gfp构建转染细胞的CLS显微镜将PKC与接触蛋白共定位结合生化研究，使用分离的重组蛋白、细胞分离、膜渗透交联剂和免疫沉淀。抑制剂和激活剂的研究将揭示PKC活性和PKC依赖性接触蛋白磷酸化在这些过程中的作用。Während der Embryogenese und der undundheilung ist die Ausbildung von Kontakten zwischen Zellen und und extrazellulären Matrix ein Prozess von grundlegender Bedeutung。动力学与动力学研究，结构与动力学研究，können in der Zellkultur undersucht werden。Auf der zytoplasmatischen Seite der vollständig ausgebildeten (reifen) Zell-Matrix-Kontakstellen stationärer Zellen wurde eine eindrucksvolle Zahl von Proteinen lokalisiert, die in vitro underander and mit microfilament wehselirken。3 .跨膜整合素家族（transmembrane - proteinen der integrin - family）；跨膜整合素家族（transmembrane integrin - family）；1 .基于交互机制，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次，基于组件层次。Bei der Regulation ß ß Vorgänge wind jedoch protein phospylierungs - prozessen durch Kinasen wider Proteinkinase C and der focal adhesion kinase eine große Bedeutung beigemessen。

In animals, formation of cell-matrix contacts is essential for embryogenesis and wound healing. Assembly and dynamics of such structures can be studied in tissue culture, and a large number of proteins have been found localized at the cytoplasmic face of these contact sites, where they are assumed to link microfilament ends to the plasma membrane. However, little is known on the regulation of cell-matrix adhesion sites, i.e. their assembly, maturation and disassembly in reaction to extra- and intracellular signals. In the project presented here, we would like to study the role of protein kinase C (PKC) in these events. Preliminary data describe the interactions of several isotypes of this kinase family with actin, vinculin and talin which are all essential components of cell-matrix contacts. We propose to study these interactions in detail and to expand these studies to other cell contact proteins. We will follow translocation of PKC isotypes during cell adhesion, spreading and migration. Colocalization of PKC with the contact proteins by immunofluorescence and by CLS microscopy of GFP-construct transfected cells will be combined with biochemical studies, using isolated recombinant proteins, cell fractionation, membrane-permeant crosslinkers and immuno-precipitation. Inhibitor and activator studies will reveal information on the role of PKC activity and PKC-dependent phosphorylation of contact proteins in these processes. Während der Embryogenese und der Wundheilung ist die Ausbildung von Kontakten zwischen Zellen und der extrazellulären Matrix ein Prozess von grundlegender Bedeutung. Aufbau und Dynamik solcher Kontakte, die morphologisch diskrete Strukturen darstellen, können in der Zellkultur untersucht werden. Auf der zytoplasmatischen Seite der vollständig ausgebildeten (reifen) Zell-Matrix-Kontakstellen stationärer Zellen wurde eine eindrucksvolle Zahl von Proteinen lokalisiert, die in vitro untereinander und mit Mikrofilamenten wechselwirken. Es wird daher angenommen, daß diese Proteine die membrannahen Enden der Mikrofilamente in Suprastrukturen organisieren, welche dann mit den Transmembran-Proteinen der Integrin-Familie verknüpft werden. Die Kinetik solcher Interaktionen, die Hierarchie der Komponenten sowie die Steuerung der Kontaktausbildung durch extra- und intrazelluläre Signale sind noch weitgehend unbekannt. Bei der Regulation dieser Vorgänge wird jedoch Proteinphosphorylierungs-Prozessen durch Kinasen wie der Proteinkinase C und der "focal adhesion kinase" eine große Bedeutung beigemessen.