化学物質の初期胚におよぼす点火および遅発影響の検出-初期胚の培養と移植系の応用-

化学物质对早期胚胎的点燃和延迟效应检测-早期胚胎培养和移植系统的应用-

• 批准号: 60035056
• 负责人: 松本 信雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Environmental Science
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60035056/
• 关键词: メチル水銀; Buthionine sulfoximine; Cystine; アクリジン・オレンジ; 蛍光顕微鏡法; 胚移植; 姉妹染色分体交換; 晩発影響

研究目的:近年、初期発生において、たとえ点火影響(Initiation)としては軽微なものであってもそれが潜在化し、後の発育過程において重大な異常として顕在化する可能性が指摘されている。この晩発性の影響を検出する目的で、まず【◯!1】マウス着床前胚の培養系を用いメチル水銀(MMC)の毒性機構に関し検討し、次いで【◯!2】妊娠3日目のマウスにアクリジン・オレンジ(AO)投与し、胚の発育への影響の有無ならびに雄マウスにAO投与し、交配・受精によるAOの移行の有無について検討した。さらに【◯!3】4NQO,Mitomycin Cにて胚盤胞を処理しその後に仮親に移植し発育への晩発影響についても観察をした。結果と考察:【◯!1】前回はアミノ酸のうちとくにCystine添加によりMMCの毒性発現が促進されることを認めたが、今回はCysteine(0.5-1.0mM)のみの添加を試みたが、胚盤胞の発育阻害が明らかに認められた。次に、MMCとCystineを培地に添加し、さらにGSHの合成を特異的に阻害するButhioninesulfoximine(BTO)を添加することにより、MMCの毒性発現は抑制された。 Cystine添加によりGSHの合成は促進されるが、BTOの添加によりGSHの合成ならびにCystineの移送阻害が生じ、MMCの毒性発現に影響を与えたものと考えられる。【◯!2】母獣へAO20mg/Kg投与ではその後の発育に影響は認められず、40mg/Kg投与で胎仔の発育遅延、60mg/Kg投与では母獣7匹中1匹が死亡した。また、雄マウスにAO40mg/Kg投与の2時間後に採取した精子には明らかにAOによる蛍光が認められた。同じ処理の雄を無処理の雌と交配し、えられた前核期胚を暗視野蛍光顕微鏡で観察すると胚の自家蛍光の他に明らかにAOによる蛍光が認められた。【◯!3】4NQOおよびMitomycin C処理により胚盤胞細胞の姉妹染色分体交換の頻度が増加した。4nqo処理後仮親子宮に移植の場合は明らかにその後の発育遅延がみとめられた。

Objective: In recent years, the Initiation of ignition and the possibility of significant abnormality in the process of development have been investigated. The purpose of this study is to investigate the impact of the late development of the disease. 1] The culture system of preimplantation embryos was investigated using the toxicity mechanism of MMC, and the second time was [! 2) On the 3rd day of pregnancy, there is no change in the relationship between AO and embryo development.さらに【◯! 3) 4NQO,Mitomycin C is used to investigate the effects of blastoderm cell treatment on the development of embryo after transplantation. The result: ! 1. Cystine (0.5-1.0mM) was added to the cytosol to inhibit the development of blastoderm cells. In addition, MMC and Cystine were added to the culture medium, and the synthesis of GSH was specifically inhibited by buthionesuximine (BTO). The addition of Cystine promotes the synthesis of GSH, the addition of BTO inhibits the transfer of Cystine, and the toxicity of MMC.【◯! 2) The effect of 20mg/Kg of AO on the development of the fetus was observed, the development of the fetus was delayed by 40mg/Kg of AO, and 1 of 7 fetuses died by 60mg/Kg of AO. The sperm was collected 2 hours after administration of 40mg/Kg of the drug. The male and female of the same treatment were mated, and the female and male of the same treatment were detected by dark field microscope.【◯! 3) The frequency of chromatid exchange in blastoderm cells increased under 4-NQO and Mitomycin C treatment. 4. After nqo treatment, the uterus transplantation was delayed.

项目成果

TERATOLOGY THE INTERNATIONAL JOURNAL OF ABNORMAL DEVELOPMENT. 32-3. (1985)

畸形学国际异常发育杂志。

ACTA OBSTETRICA ET GYNAECOLOGICA JAPONICA. 37-3. (1985)

日本妇产学学报。

TOXICOLOGY LETTERS. (1985)

毒理学快报。