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機能膜アセンブリーにおけるリン脂質の挙動と役割の極性基種特異性

磷脂行为的极性基团物种特异性及其在功能膜组装中的作用

基本信息

批准号：
60214003
负责人：
渋谷勲
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

膜の機能発現におけるリン脂質極性基構造の特異的な役割、ならびに膜アセンブリーにおける各リン脂質の挙動の特異性を明らかにするため、大腸菌およびパン酵母の系で次の2方向の研究を行った。大腸菌の主要膜リン脂質の一つカルジオリピンの生合成触媒酵素カルジオリピンシンターゼについて、その構造遺伝子と考えられるcLs遺伝子およびその周辺の2.5Kbpの塩基配列を決定し、DNA一次構造から諸解析を行った。配列上唯一可能なリーディングフレーム1,242bpが存在しており、このcLs遺伝子はオペロンの一員で、上流の新たに見出された遺伝子のプロモーターにより転写されること、およびcls遺伝子の発現にはこの上流遺伝子の飜訳が共役する必要があることが判明した。さらにプラスミド上でcls遺伝子の中央部に1.5kbのカナマイシン耐性遺伝子を挿入し、DNAポリメラーゼI温度感受性株の染色体相同部分と組み換え、cls遺伝子の完全欠損変異株の作成に成功した。この株はカルジオリピンシンターゼを欠くが、培地条件によっては野生株並みに生育できるので、大腸菌にとってcls遺伝子およびその産物は必須ではないと結論される。一方、パン酵母の含窒素リン脂質de novo生合成の開始過程の酵素ホスファチジルセリンシンターゼの構造遺伝子PSSについても、その塩基配列を決定し、PSS遺伝子の両端を欠く断片を挿入した組み込みベクターおよびPSS遺伝子の大部分を他の遺伝子(LEU2)と置き換えたDNA断片それぞれを用い、染色体上のPSS遺伝子を完全破壊することができた。これら完全欠損株では、いずれもホスファチジルセリンおよび同シンターゼが検出されないが、エタノールアミンまたはコリンを培地に添加すると生育可能であった。これらの株の諸特性を解析し、酵母細胞におけるホスファチジルセリンの意義について多くの知見を得た。

The study of membrane function development, lipid polar structure and specificity of lipid movement in E. coli and yeast systems was carried out in two directions. The main membrane lipids of E. coli are determined by the molecular structure of the major membrane lipids, the enzyme synthesis, the molecular structure of the major membrane lipids, the molecular structure of the major membrane lipids, the molecular structure of the major membrane lipids, the molecular structure of the major membrane lipids, and the molecular structure of the major membrane lipids. 1,242bp in the sequence is the only possible sequence. The cLs gene is a member of the upstream gene. The upstream gene is a new member of the upstream gene. The upstream gene is a member of the upstream gene. The upstream gene is a member of the upstream gene. A 1.5 kb DNA fragment from the central part of the cls gene was successfully inserted into the DNA fragment of the temperature-sensitive strain, and a complete deletion of the cls gene was successfully constructed. The results show that the growth of wild and wild strains is not easy, and the growth of E. coli is not easy. In one aspect, the enzyme sequence for the initiation process of lipid de novo synthesis in yeast is determined by the sequence of structural genes, PSS, and the sequence of all gene bases. The sequence of DNA fragments at the end of PSS gene is determined by the sequence of DNA fragments. Most of PSS gene fragments are used by other genes (LEU2). The sequence of DNA fragments on chromosomes is completely broken. This is the first time that a child has been born, and the first time that a child has been born, the second time that a child has been born. The characteristics of these strains were analyzed, and the significance of yeast cells was analyzed.